脑脊液中的一株苛养性G-杆菌

巴斯德之徒 · 发表于 2007-6-22 14:25:55

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天前在一脑外科病人的脑脊液中分离到一苛养性G-杆菌,于脑脊液接种双相血培养基的第三天生长,在固相琼脂上为橙红色小菌落,72h后形成干燥皱折的菌苔.
转种麦康凯,营养琼脂不生长.
转种强化血琼脂培养基和嗜血杆菌选择性培养基,24h菌落细如针尖,无色透明,需要仔细观测才能看见菌落.Gram染色G-杆菌,细小,长短基本一致,菌体两端尖细而中间鼓,拉丝试验阳性,万古霉素耐药.
延长培养至48h后菌落增大到1.5mm左右,4天后菌落达到2.5mm左右,菌落灰白色半透明,很象流感杆菌菌落.但在嗜血杆菌选择性培养基上菌落非常粘着,粘在琼脂上十分不易挑取.血琼脂上粘性较小,易乳化.72h菌落为略带橙色的黏液性透明菌落.用滤纸沾起菌落可以看见明显的橙红色色素.
当时用HTM做药敏时培养48都未发现有任何细微的生长(说明不需要X,V因子),改用5%含血MHA,仍然未见生长(说明仅仅含血液不能支持其生长),于昨日采用我室研制的强化血琼脂做药敏,发现该菌对很多抗生素均敏感PIP,GM,CIP,CXM,TE,SXT,CRO,AZM 均敏感.
生化反应(采用酶法6~72h):
尿酶 + ,动力 +(直接取增菌液暗视野观察);
精/鸟/赖氨酸脱羧酶 -,枸橼酸盐 -,硝还/亚硝还 -,七叶苷 -,吲哚 -,ONPG -,DNA -,H2S -,乙酰胺 -,葡萄糖 -,蔗糖 -,乳糖 -,麦芽糖 -, 甘露糖 -,木糖 -.
大家帮忙看看是什么细菌.先谢谢各位老师和朋友了.:( :L :funk:

hxwsw · 发表于 2007-6-22 18:48:23

许可以在产红色素非发酵菌里先考虑！不知氧化酶是否为弱阳性，最好有新鲜配制的来做一下，另外试试３０度是否比３５度生长得稍好，在紫外灯下是否呈黑色，不然弄过来我用PHoenix100再做一次，总之，一定要把它弄明白，只要不是新菌种就还有最后的手段（到我院高新区实验室．．．．哈哈！）:P

hxwsw · 发表于 2007-6-22 18:55:16

充一点：此病人是脑外伤病人，可能是受创环境的细菌，这种细菌鉴定很困难啊！连巴版都头痛，鉴定起来肯定很困难的，不知病人ＣＳＦ常规及生化如果，是否有感染体征！

巴斯德之徒 · 发表于 2007-6-22 19:40:45

病人做了两次腰穿,上次只送了培养-----可能是高度怀疑感染,前天又做了一次:这次CSF的各项指标均未见明显异常,和上次我涂片时见到的情况完全不同,上次未离心标本(量少,所以未离心)直接涂片,白细胞5~10个/HP,还有明显的蛋白凝快------但不知为什么没有做生化检验.

巴斯德之徒 · 发表于 2007-6-28 21:26:20

size=2]该菌的最终鉴定结果为: 嗜中温甲基杆菌.

该菌的是一株产黏液变异了的嗜中温甲基杆菌,在传代3代后恢复了典型的干燥皱折特征,色素的产生较慢,在菌落形成后的两到三天才会逐渐呈现橙红色色素.
现在对其鉴定过程做个总结:

脑脊液接种双相血培养基的第三天生长,在固相琼脂上为橙红色小菌落,72h后形成干燥皱折的菌苔.
转种麦康凯,营养琼脂于35℃培养48h不生长.
转种强化血琼脂培养基和嗜血杆菌选择性培养基,24h菌落细如针尖,无色透明,需要仔细观测才能看见菌落.Gram染色着色浅,为G-杆菌,细小,长短基本一致,菌体两端尖细而中间鼓,拉丝试验阳性,万古霉素耐药.
在嗜血杆菌选择性培养基上,延长培养至48h后菌落增大到1.5mm左右,4天后菌落达到2.5mm左右,菌落灰白色半透明,很象流感杆菌菌落.但菌落非常粘着,粘在琼脂上十分不易挑取.
血琼脂上粘性较小,易乳化.72h菌落为略带橙色的黏液性透明菌落.用滤纸沾起菌落可以看见明显的橙红色色素.
用HTM于35℃做药敏时培养48都未发现有任何细微的生长(说明不需要X,V因子),改用5%含血MHA35℃重作药敏,仍然未见生长(说明仅仅含血液不能支持其生长),最后采用我室研制的强化血琼脂做药敏,发现该菌对很多抗生素均敏感PIP,GM,CIP,CXM,TE,SXT,CRO,AZM 均敏感.
根据hxwsw老师的提示,接种普通MHA、BHA补做30℃生长实验(连续观察了6天),并在血琼脂上反复传代(两天一代,共传了3代):结果在普通MHA上30℃也能够生长,但菌落形成时间为3天(菌落约0.2mm大小),6天菌落约1.2mm,色素为橙色;在BHA上菌落形成时间也要3天，但色素要明显些；血琼脂上传到第三代时完全恢复干燥皱折橙红色菌落.
将血琼脂上菌落挑起,大量涂布于洁净滤纸上,于紫外灯下观察色素呈现淡紫黑色．
重作生化反应(采用酶法置３０℃观察４天):
快速尿酶 + ,动力 +(直接取增菌液暗视野观察，约有5~10%的细菌呈现奇怪的“跷跷板”样运动);
氧化酶 +，触酶 +
精/鸟/赖氨酸脱羧酶 -,枸橼酸盐 -,硝还/亚硝还 -,七叶苷 -,吲哚 -,ONPG -,DNA -,H2S -,乙酰胺 -,葡萄糖 -,蔗糖 -,乳糖 -,麦芽糖 -, 甘露糖 -,木糖＋（弱）．
从以上的鉴定过程中总结如下经验：其一，该菌其实并非严格意义上的苛养菌：不需要X,V因子，在不含血液的培养基也能生长，单单加入血液也不能促进其生长，问题的关键在于温度，其次由于该菌生长非常缓慢，一定要坚持多观察几天；
另外，该菌在35℃培养时，在不同的非选择性培养基上的生长状况并不相同，在我室研制的强化血琼脂上生长最快（菌落形成时间仅需要２４h），传代时典型菌落恢复也最快；而在35℃时该菌在MHA和BHA均不能生长；
再则，该菌在BHA上３０℃培养至第5天时菌落可自行转化为干燥型菌落（而在MHA上见不到此现象）。
最后，该菌在CLSI上并没有相应的药敏方案，我室是套用非发酵菌的解释标准，得出的结果可能与临床存在差异。但根据经典书籍和我们所做的“药敏”的推断，该菌应该没有太大耐药性，常规无须药敏。还因为该菌在35℃时接种于MHA、含血MHA以及HTM上均不生长，而30℃培养又需要3天以上的时间，由于长时间培养将导致抗生素降解后的效价降低问题，可能会出现较多的假耐药。故而不推荐常规药敏。