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ESBLs目录
简介
产ESBLs菌株的耐药特点
促使ESBLs出现和传播的因素及临床预防
产ESBLs菌株如何选择抗生素进行治疗？
ESBLs菌株的检测方法：一、纸片扩散法检测ESBL
二、检测ESBLs最低抑菌浓度(MIC)
三、用于ESBLs筛选的特殊试验
四、其他检测方法(非NCCLS推荐的方法)
简介
产ESBLs菌株的耐药特点
促使ESBLs出现和传播的因素及临床预防
产ESBLs菌株如何选择抗生素进行治疗？
ESBLs菌株的检测方法： 一、纸片扩散法检测ESBL
二、检测ESBLs最低抑菌浓度(MIC)
三、用于ESBLs筛选的特殊试验
四、其他检测方法(非NCCLS推荐的方法)
展开编辑本段简介
ESBLs是英文“Extended Spectrum Beta-Lactamases”的缩写，中文翻译为“超广谱β-内酰胺酶”。大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌等通常最易生产，其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、绿脓杆菌也可生产。其特点是可以水解灭活青霉素类抗生素、头孢菌素（主要为第三代头 大肠杆菌
孢菌素，如头孢他啶、头孢哌酮等，马斯平等除外）和单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南、卡芦莫南等），通常不水解头霉素类（头孢西丁、头孢美唑等）和碳青霉烯类（亚胺培南、美罗培南等）。其活性可以被克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-内酰胺酶抑制剂所抑制。我国的产ESBLs菌株主要是分解头孢噻肟的CTX-M型。 产ESBLs菌株的耐药特点？
编辑本段产ESBLs菌株的耐药特点
如果临床出现产ESBLs菌株，则对青霉素类、第三代头孢菌素（头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、头孢曲松等）、单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南）耐药，ESBLs在实验室有一专门的检测方法，如果病人的药敏报告单已注明为产ESBLs菌株，则表明已经实验室确证。如果病人药敏报告单未注明为产ESBLs菌株，三代头孢菌素和单环酰胺类抗生素中有一种MIC≥2ug/ml，或符合CAZ≤22mm、ATM≤27mm
、CTX≤27mm、CRO≤25mm其中一个，则提示菌株可能产ESBLs，这种情况下，即使实验室报告为敏感的第三代头孢菌素和单环β-内酰胺类抗生素，在临床也不推荐使用。
编辑本段促使ESBLs出现和传播的因素及临床预防
第三代头孢菌素和单环β-内酰胺类抗生素的广泛应用是导致产ESBLs菌株出现及传播的主要因素，此外，尚有其它因素。若临床出现产ESBLs菌株，会在病人和医院之间及不同菌株之间相互传播，导致临床高死亡率及高比率持续性定殖，应充分引起注意。因此，在治疗时，减少第三代头孢菌素和单环β-内酰胺类抗生素的应用，可以显著降低产ESBLs菌株的出现。
编辑本段产ESBLs菌株如何选择抗生素进行治疗？
哌拉西林/他唑巴坦
首先，一旦确定为产ESBLs菌株，应立即停止使用第三代头孢菌素和单环β-内酰胺类抗生素的治疗。 对付产ESBLs菌株，最有效的抗生素为碳青霉烯类，亚胺培南、美罗培南等较为常用。其次，头霉素类中的头孢西丁、头孢美唑等对其也有效。因为ESBLs活性可以被克拉维酸、舒巴坦、他
唑巴坦等β-内酰胺酶抑制剂所抑制，所以，也可以选择β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂，如替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等，但如果细菌同时产ESBLs和AmpC酶，这种方法就没用了，因为AmpC酶可以水解以上抗菌药物，且其活性不被克拉维酸、舒巴坦等β-内酰胺酶抑制剂所抑制。
编辑本段ESBLs菌株的检测方法：
目前检测ESBLs的常用方法有双纸片协同试验（即阿莫西林双纸片协同试验与替卡西林双纸片协同试验，以NCCLS纸片表型确证试验测定结果为标准，筛选出产ESBLs）、纸片表型确证试验、琼脂稀释法确证实验、三维试验等。
一、纸片扩散法检测ESBL
1.筛选试验:选用头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟或头孢曲松(每片含量均为30μg)药敏纸片中的至少2种,用苗勒-欣顿(MHA)琼脂,标准纸片扩散法测试抑菌环直径,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1997年标准进行判断。凡头孢泊肟或头孢他啶的抑菌环直径≤22mm,头孢曲松≤25mm,氨曲南或头孢噻肟≤27mm,均应高度怀疑为ESBLs菌株,应进一步作确认试验来加以确诊。 2.确认试验:用头孢他啶(每片30μg)和头孢他啶加克拉维酸(30μg和10μg);头孢噻肟(每片30μg)和头孢噻肟加克拉维酸(30μg和10μg);分别测量2种纸片单独及加克拉维酸的抑菌环直径。加克拉维酸和不加克拉维酸的抑菌环直径≥5mm可确认为ESBLs菌株。 质控菌株:大肠埃希菌ATCC25922(头孢他啶:头孢他晓+克拉维酸≤2mm; 肺炎克雷伯菌ATCC700603(头孢他啶:头孢他啶+克拉维酸≥5mm)。
二、检测ESBLs最低抑菌浓度(MIC)
1.筛选试验:选用头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟或头孢曲松至少2种以上,用阳离子增强的MH肉汤(标准肉汤稀释法)稀释至1mg/L,凡被测菌在上述各管中能够生长(MIC≥2μg/ml),均应高度怀疑为ESBLs,应进一步作确认试验来加以确诊。 2.确认试验:用标准肉汤稀释法测定MIC的方法,按NCCLS(1997)推荐的筛选和确认ESBLs的标准进行判断。选用头孢噻肟单独稀释(范围0.25~64mg/L)及头孢噻肟(稀释范围相同)加克拉维酸(每管4mg/L);头孢他啶单独稀释(范围0.25~128mg/L)及头孢他啶加克拉维酸(每管4mg/L),上述2种药物必须同时进行试验,结果加克拉维酸和不加克拉维酸的MIC差值如≥8倍(3个稀释度),可确认为ESBLs菌株。质控菌株:大肠埃希菌ATTC25922(头孢他啶:头孢他啶+克拉维酸<8倍);肺炎克雷伯菌ATCC700603(头孢他啶:头孢他啶+克拉维酸≥8倍)。
三、用于ESBLs筛选的特殊试验
1.在MicroScan的一些药敏试剂条中包括了头孢泊肟、头孢他啶或氨曲南,且每种试剂条均有2种指示药物,当被试菌对这些指示药物的MIC≥2mg/L时,即可筛选出可疑的ESBLs菌株,符合NCCLS(1999)推荐的筛选药物组合及浓度范围,可用于ESBLs的筛选。 2.用浓度梯度法(Etest法)的常规试条中的三代头孢菌素或氨曲南(2种以上),凡MIC≥2mg/L时,即高度怀疑为ESBLs,应进一步作确认试验来加以确诊。现有2种Etest法的ESBLs确认试条,分别是头孢噻肟及头孢噻肟加克拉维酸、头孢他啶及头孢他啶加克拉维酸。检测结果加克拉维酸和不加克拉维酸的MIC差值≥8倍（3个稀释度）,可确认为ESBLs菌株。 Etest检测ESBLs的具体操作步骤是 (1)在常规试验中选出对三代头孢MIC≥1mg/L的菌株(比NCCLS的标准低一个稀释度); (2)按NCCLS(1999)推荐的方法,用2种底物筛选和确认ESBLs(筛选试验:在头孢噻肟或头孢曲松中选1种,头孢他啶或氨曲南中选1种。 确认试验:用头孢噻肟和头孢他啶); (3)确认该菌对头孢西丁的MIC≤8mg/L,以排除质粒AmpC酶; (4)再测定该菌对其他非β内酰胺抗生素的药敏模式,以指导抗菌治疗或收集流行病学资料。
四、其他检测方法(非NCCLS推荐的方法)
1.双纸片扩散法:药敏平板和菌液的制备方法与常规药物敏感试验相同,将菌液涂布在，MH琼脂平板上,贴上药敏纸片,1张为三代头孢菌素(头孢他啶、头孢噻肟或头孢曲松)或氨曲南,1张为含有β内酰胺酶抑制剂(克拉维酸10mg/L)的纸片,两纸片相距20~30mm(中心-中心),35℃孵育18~24小时,观察结果。如显示协同为阳性。 2.三相扩散法:该法又有直接法和间接法2种。直接三相扩散法是在纸片扩散法的基础上略加改动,首先按标准纸片扩散法进行操作,贴上药敏纸片,在离纸片3mm处打一个小孔(靠近平板中央一侧),内加200μl浓度为105~106的菌液,35℃孵育过夜,如在头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松或氨曲南周围的抑菌圈形状发生改变,试验为阳性。如果在上述抗生素周围的抑菌圈很小或没有抑菌环,应该用间接法重复。间接三相扩散法与直接法不同在于,直接法平板表面涂布的细菌和小孔内的细菌是相同菌,而间接法平板表面涂布的细菌是用已知对 上述药物均敏感的菌株如大肠埃希菌ATCC25922,小孔内为试验菌。如出现试验菌孔干扰敏感菌株形成抑菌环的现象即判断为阳性。该试验的优点在于可以同时了解细菌对抗生素的敏感情况和产ESBLs的情况,但需要有经验的人员来判断结果。 此外,尚可用生物化学技术检测ESBLs的等电点(等电聚焦电泳),或分析酶的底物谱及抑制物谱来分型。也可用分子生物学技术检测和分析编码ESBLs的基因或突变位点,如聚合酶链反应(PCR)-SSCP、PCR-限制性内切酶试验、PCR-点杂交、DNA探针或序列分析等。 |
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发表于 2012-5-17 16:17
发表于 2012-5-17 16:34
发表于 2012-5-17 17:15
