结核分枝杆菌快速诊断试验效果怎样？如何选择？

莲雾

<span style="FONT-SIZE: 15pt; COLOR: black; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: Arial; mso-hansi-font-family: Arial; mso-bidi-font-family: Arial; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA; mso-bidi-font-size: 10.0pt;"><strong>结核分枝杆菌快速诊断试验种类很多，怎么样有的放矢的选择恰当的检测方法，迅速作出结核感染的判断？</strong>
                <p class="MsoNormal" style="MARGIN: 12pt 0cm 0pt 42pt; LINE-HEIGHT: 150%; mso-pagination: widow-orphan;"><span>－摘自<strong>A systematic review of rapid diagnostic tests for the detection of tuberculosis infection. </strong></span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 9.5pt; COLOR: black; FONT-FAMILY: Verdana; mso-bidi-font-family: 宋体; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 12.0pt;"><a href="javascript:AL_get(this,%20'jour',%20'Health%20Technol%20Assess.');"><font color="#0033cc">Health Technol Assess.</font></a> 2007 Jan;11(3):1-196</span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 15pt; COLOR: black; FONT-FAMILY: Verdana; mso-bidi-font-family: 宋体; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 9.5pt;">
                                <p></p></span></p><p></p><p></p><p></p><p></p></span><br/> CiEQzD1f.doc (28 KB, 下载次数: 11588)

2007-5-20 20:00 上传

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结核分枝杆菌快速诊断试验效果怎样？如何选择？

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莲雾

实验室诊断结核的传统方法是涂片抗酸染色和分枝杆菌培养。但这些方法敏感性差或报告时间长。目前，针对基因的分子生物学方法和针对结核分支杆菌抗原抗体的免疫学方法已成为结核诊断技术的研究热点。然而，分子和免疫方法具有哪些优缺点呢？文献将分子和免疫诊断技术作了全面的综述，对正确选择合适的诊断方法很有益处:lol 分子免疫方法诊断TB.pdf (1.57 MB, 下载次数: 49)

2008-6-10 19:26 上传

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寶島

雖然傳統的結核菌培養耗時耗工, 但它仍然是診斷結核菌感染的金標準.

目前面對非結核分秓桿菌(NTM)感染的增加與耐藥嚴重的分衼桿菌感染, 唯有分離出菌株進行鑑定與藥敏試驗, 才能檢測出耐藥的菌株

與區別NTM與TB.

分生與免疫技術診斷結核菌感染, 是屬於輔助性的檢測方法, 不可以取代傳統的培養技術.

莲雾

同意黄老师的看法，分子生物学和免疫技术不能取代传统的培养方法。但分生在耐药基因检测、免疫技术在潜在感染（latant infection）病人的筛查有其优势，是今后几年将得到大力发展的技术。

莲雾

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David

Journal of Microbiological Methods
Volume 75, Issue 1, September 2008, Pages 1-11

Review
Molecular diagnostic tools in mycobacteriology

Ioannis K. Neonakisa, , 1, , Zoe Gittia, 1, Elias Krambovitisb and Demetrios A. Spandidosa

aMycobacteriology Laboratory, Department of Clinical Bacteriology, Parasitology, Zoonoses and Geographical Medicine, University Hospital of Heraklion, 712 01 Heraklion, Crete, Greece bMicrobiology and Parasitology Laboratory, Department of Veterinary Medicine, School of Health Sciences, University of Thessaly, Karditsa, Greece
Received 30 January 2008;  revised 14 May 2008;  accepted 23 May 2008.  Available online 31 May 2008.

Abstract
Although the diagnosis of mycobacteriosis and susceptibility testing are still primarily based on conventional methods (staining, culture, biochemical analysis, proportional method), a series of molecular assays are increasingly introduced and incorporated in the workflow of clinical mycobacteriology laboratories worldwide. These assays are rapid and offer high sensitivities and specificities. In the present review, we describe the molecular assays concerning the early detection of Mycobacteria in clinical specimens, the identification of mycobacterial species, the detection of drug resistance and the typing for epidemiological investigations.

Keywords: Drug resistance; Molecular diagnostics; MTBC; Mycobacteria; NTM; Tuberculosis

Article Outline
1. Introduction
2. Direct detection of mycobacteria in clinical specimens
2.1. In-house PCR for detection of mycobacteria from clinical specimens
2.2. Commercially available assays
2.2.1. Cobas Amplicor M. tuberculosis assay (Amplicor; Roche Diagnostic Systems, Branchburg, NJ )
2.2.2. Amplified M. tuberculosis direct test (AMTD; bio Merieux, Gen-probe, Inc., San Diego, Calif.)
2.2.3. DProbe Tec ET (energy transfer) M. tuberculosis Direct Detection Assay (DTB), (BDProbe Tec; Becton Dickinson Bioscience, Sparks, Md.)
2.2.4. Genotype mycobacteria direct assay for detection of M. tuberculosis complex and four atypical mycobacteria (Hain Lifescience, Nehren, Germany)
2.2.5. LCx MTBC assay (Abbott Laboratories, Diagnostic Division, Chicago, USA)
2.2.5.1. Remarks
3. Identification of mycobacterial species from culture by molecular methods
3.1. PCR-based sequencing
3.2. DNA probe technology
3.3. Line probe technology (hybridization in strips)
3.3.1. Inno LiPA Mycobacteria v2, (Innogenetics, Ghent, Belgium)
3.3.2. GenoType Mycobacterium (Hain Lifescience, Nehren, Germany)
3.4. PRA method. [polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis for identification of mycobacteria from culture]
3.5. Pyrosequencing
3.6. DNA microarrays (DNA chips)
4. Molecular methods for detecting drug resistance in mycobacterial strains
4.1. PCR-DNA sequencing
4.2. Hybridization-based techniques
4.2.1. Line probe technology
4.2.1.1. Inno-LiPA RifTB (Innogenetics, Ghent, Belgium)
4.2.1.2. GenoType MTBDR plus (Hain Lifescience, Germany)
4.3. Hybridization on DNA chips
4.4. PCR-SSCP (single-strand-conformation-polymorphisms)
4.5. Pyrosequencing
4.6. Real-time PCR methodology
4.7. Mycobacteriophage D29-based assay
5. Molecular epidemiological methods
5.1. IS6110-RFLP method
5.2. Spoligotyping (spacer oligotyping)
5.3. MIRU-VNTR method
5.4. Repetitive sequence-based PCR method
5.5. Remarks
References

莲雾

目前，分枝杆菌检测和鉴定技术层出不穷，但真正能够用于临床，取得三证的产品少之又少:L

星火

上海肺科医院课题组建立改良噬菌体检测技术

本报讯  （记者陈青）结核病的早期快速诊断和耐药性检测，是早期发现和控制结核病的有效手段。同济大学附属上海市肺科医院胡忠义教授领衔的课题组历时5年多，在国内首先将基因芯片技术用于耐多药结核杆菌的快速检测，建立了具有自主知识产权的改良噬菌体检测技术，实现了2～3天获得结核病细菌学诊断、当天获得耐药性基因诊断、1～2周内获得耐药性细菌型诊断，比常规方法提早了6～8周。           结核病是严重威胁人类健康的重大传染病，也是全球关注的公共卫生问题和社会问题。我国的结核病疫情十分严峻，结核病患者人数居世界第二。同时，我国又是结核病高耐药国家，获得性总耐药率为46%，世界卫生组织已将我国列为需要特别引起警示的国家和地区的第一位。           “由于缺乏早期、快速的诊断和耐药性测定方法，致使大量活动性结核病人未能及时发现，这会加剧结核病在人群中的传播，进而使结核病患者数量持续攀升。”胡忠义教授介绍说，传统的结核病细菌学检测和耐药性测定需要花费2～3月时间，远不能满足临床诊治和预防控制的需要。新的诊断和耐药性测定技术，如快速仪器培养测定虽只需7～10天，但还是需要3～4周的细菌培养时间；耐药基因检测虽然快速、灵敏，但不是操作繁琐、技术要求高，就是费用昂贵、临床应用存在问题，迫切需要改进。           在上海市科委及国家攻关课题的资助下，胡忠义教授领衔的课题组建立了快速检测结核分枝杆菌及其耐药性的微量噬菌体滴板法、双相罗氏培养法基因和基因芯片检测法，还研制成功了相应的检测试剂。目前该研究成果已申请3项发明专利，获得授权的有2项。           专家认为，这一研究成果对于指导临床用药、预防新的耐多药结核病的形成、控制耐多药结核流行与传播具有重要作用，还可显著降低耐多药结核病的诊治费用，提高治愈率，降低死亡率。“按公认的每个传染源每年可传染10～15个健康者计算，可使大量健康者免遭患结核病之苦。”

网络编辑： 来源： 文汇报 发布日期：2009-02-24

星火

本报武汉2月23日专电  （驻鄂记者钱忠军  通讯员金安江  范敬群）华中农业大学农业微生物学国家重点实验室何正国教授领衔的课题组在抗结核研究中取得重要突破。他们构建了一个在常规条件下对结核分枝杆菌的功能基因进行方便安全研究的遗传操作平台，并发现了一个可能在结核病原潜伏感染及耐药性突变产生中发挥关键作用的基因WhiB-3。
     
    曾经蔓延全球的肺结核是由结核分枝杆菌通过空气传播感染人或动物而引起的，20世纪因医药事业的进步而消退。但是已被大多数人淡忘的肺结核近年来又“死灰复燃”，成为目前死亡率最高的人兽共患传染病，每年导致全球150－200万人死亡，并对农业造成了巨大危害。去年，我国专门启动了结核病等重大传染病防治专项。
     
    据介绍，结核病原的研究一直存在两个突出问题，一是结核分枝杆菌生长极其缓慢，遗传操作不方便；另一个是它具有很强的感染致病能力，对研究人员健康存在威胁。因此，特别需要建立一个能在常规实验条件下方便安全地研究其功能基因的新技术。
     
    在这项研究中，何正国教授带领的课题组建立了一个新型的细菌单杂交报告系统。利用该系统，他们已经发现了100多个以前不知道功能的转录因子可能直接参与调控结核分枝杆菌的潜伏感染过程。特别是一个名为whiB-3的基因被首次发现能广泛调控结核分枝杆菌多个致病基因的表达，这暗示该基因可能在结核病原潜伏感染及其耐药性的产生中发挥关键作用。据悉，有关成果已于日前在国际知名学术刊物《基因组研究》上在线发表。
     
    何正国教授介绍，由于新发现的基因极有希望成为抗结核新型药物靶标，具有明显的药物应用潜力，相关发现已经申请了多项国家发明专利。
  


网络编辑：  来源： 文汇报 发布日期：2009-02-24

JIADINGSSD

噬菌体检测技术,快是快,但临床应用还得上海市疾控肺科组认可.

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　肺结核的传统检测法包括为受试者注射结核菌素,如果皮肤肿起,就标志着患有这种病。这样的皮试往往会产生假阳性,即错误地将受试者确定为需要治疗;相反,有时也会错误地将结核菌携带者排除在感染病例外。  

　　研究人员称,一种新型血检法将会使医生们更准确地检查出哪些人可能会出现肺结核症状。伦敦帝国学院的阿吉特·拉尔瓦尼教授说,这种新型血检法叫酶联免疫斑点法(ELISpot),对结核菌携带者的诊断准确率比传统方法高出1.5倍。  

　　“从全世界的范围来看,如果把那些数字累加起来,你将会感觉到该技术所带来的巨大影响”,拉尔瓦尼说。该发现发表在《内科医学年鉴》(Annals of Internal M edicine)杂志上。肺结核由细菌引起,攻击目标是肺部,但是也可以引起包括淋巴结在内的身体其他部位发炎。  

　　据世界卫生组织估计:在全世界人口中,大约有三分之一感染结核菌,全世界每年诊断出将近900万活动性肺结核的新病例,大多数感染者生活在发展中国家。  

　　活动性肺结核病患者会表现出发烧、不断咳嗽、食欲不振等症状,而潜伏性肺结核病患者则不表现出症状。及时有效的治疗可以防止许多患者的潜伏性肺结核发展成为活动性肺结核。然而,抗药菌的出现和传播使肺结核的治疗更加困难,从而可能会使该病在未来更加致命。  

　　在土耳其,拉尔瓦尼及同事检查了暴露于肺结核家庭环境中的908名健康儿童。皮试结果表明580名儿童患有潜伏性肺结核,需要进行药物治疗,以免转化为活动性肺结核;而血检结果发现只有380名儿童患有潜伏性肺结核。经过治疗,仍有12名儿童患上活动性肺结核,其中有11名儿童是通过血检确诊的。  

　　“通过血检,只需要治疗380名儿童,而不是580名,但却能够预防同样数量的活动性肺结核病例发生”,拉尔瓦尼说：“我们现在知道,血检法确实有助于把治疗指向那些最需要治疗的人,以避免发展成为活动性肺结核。”  

　　拉尔瓦尼说,下一步的任务是使该检测法更加精确,然后在发展中国家实施。
http://www.jkb.com.cn/document/78302.htm?docid=78302&cat=09C&sKsyWord=null