脑脊液找抗酸杆菌

莲雾

看到网上有网友问：脑脊液抗酸染色的阳性率是多少？有没有提高阳性率的好方法？
脑脊液一般含菌量少，抗酸染色的阳性率很低。不过，我听说有医院将抗酸染色的阳性率（包括所有标本）提高到30%，也是道听途说的。大家有什么好的经验，一起来交流交流。

莲雾

大家都不说，我只好先抛砖引玉....如果砖头都扔出来了，大家还不说....我就....

好了，谈谈我的观点：脑脊液抗酸染色的阳性率非常低，这是公认的。要提高阳性率首先要保证标本量，CSF必须大于2ml。其次，采用离心沉淀方法，并且离心速度达到3000rpm（速度太高太低都不利于抗酸杆菌的检出），时间为15min。最后，抗酸染色方法本身的敏感性低，采用快速培养方法（如MGIT960，BD公司）可提高阳性率。
:) :P

gaoxd5

不知道分枝杆菌引起的中枢神经系统感染有多少？

莲雾

结核性脑膜炎多见于5岁以下儿童，成人的感染率很低。

莲雾

采用重叠法可提高脑脊液涂片找抗酸杆菌的阳性率，具体方法如下，如果谁有兴趣不妨试试，用下来效果如何告诉大家一下，好不好？
1.将脑脊液3000rpm离心15min；
2.从离心机内小心取出试管，不破坏沉淀物状态；
3.以无菌吸管小心插入试管底部，吸取0.2ml沉淀物，注意不破坏沉淀物状态；
4.将沉淀物滴于玻片，等待自然干燥；
5.在原载物区再滴上一滴沉淀物，在空气中干燥，此步骤重复4次；
6.染色镜检。

楚楚

学习了！只是俺不搞这个，不过俺还是希望微生物检验的同行搞通了哈，让大伙都受益。:P

yngmfc

脑脊液中结核菌检查可以使用荧光显微镜法，至少观看300个视野。标本的只制作可以将脑脊液抽取后放置24小时，取其上层液面纤维状薄膜，固定后抗酸染色，阳性率较高。并且结合性脑膜炎还可以根据生化检查判定，最典型的是进行氯化物测定。并且其标本放置24小时后液面出现纤细网膜，氯化物降低早且明显可与其他细菌性、病毒性脑膜炎鉴别。

yngmfc

注意：抗酸染色必须使用蒸馏水冲洗，不得使用自来水。

茉莉花

大家在染片的过程中是否会出现菌膜脱落的问题？这方面谁有好的经验？

樵夫

近年国内外有关结脑患者CSF抗酸杆菌涂片的结果表明涂片镜检阳性率约10～20％（0～87％），但早期一些文献报道的结果较好，如1953年Stewart报道检出率91％。CSF抗酸杆菌检出率与病期、取材部位、CSF标本量、离心的速度和时间、检查时间等因素有关。

木瓜

自来水中存在非结核分枝杆菌，易造成标本的假阳性。

yngmfc

谢谢补充！写漏了！

莲雾

原帖由 茉莉花 于 2007-7-16 22:26 发表

                               
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大家在染片的过程中是否会出现菌膜脱落的问题？这方面谁有好的经验？

茉版主提的问题很好,我们在抗酸染色过程中确实有菌膜脱落的情况,尤其是胸腹水标本.遇到这种情况怎么办?我们用无水甲醛固定涂片,以替代加热固定.无水甲醛的固定更牢固,而且不会产生结晶影响读片.谁还有其他好方法吗?不妨一起交流一下.

茉莉花

原帖由 木瓜 于 2007-7-19 14:09 发表

                               
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自来水中存在非结核分枝杆菌，易造成标本的假阳性。

    这个问题想请教一下：“自来水中存在非结核分枝杆菌”在染色的过程中造成假阳性的机率究竟有多大？我们知道抗酸染色的第一步需加热促进细菌着色，而水冲洗是在此之后了，即便在冲洗时涂片上附着了非典型分枝杆菌，不会再经过加热过程，而在第2步的脱色过程中也应该脱掉了部分，所以最终的镜检造成的假阳性率又能有多少？下面传2张图片，是热染和未加热染的图片，见到的抗酸菌量有明显区别哦：

莲雾

茉版的工作态度真是科学严谨，还作了对照实验。造成假阳性的几率是多少？很小但还是有的。我们对上海三级医院的水龙头采样时发现，一些水管陈旧的水龙头中检出大量抗酸杆菌，可能是非结核分枝杆菌在水龙头内形成了生物膜。一旦生物膜脱落，冲洗玻片的水中含量还是很大的。其实，造成实验室检测结果假阳性的主要来原因还是水中的分枝杆菌污染了玻片、试管、试剂等。

[ 本帖最后由 莲雾 于 2007-8-9 16:55 编辑 ]

茉莉花

原帖由 莲雾 于 2007-8-9 16:52 发表

                               
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茉版的工作态度真是科学严谨，还作了对照实验。造成假阳性的几率是多少？很小但还是有的。我们对上海三级医院的水龙头采样时发现，一些水管陈旧的水龙头中检出大量抗酸杆菌，可能是非结核分枝杆菌在水龙头内形成 ...

哈，不是我做的试验，图片来自一幻灯中，提示抗酸染色加热和不加热有明显区别。

看了你后面的解释觉得有道理，谢了！

xiangboshu

[quote]原帖由 茉莉花 于 2007-8-8 20:27 发表

                               
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    这个问题想请教一下：“自来水中存在非结核分枝杆菌”在染色的过程中造成假阳性的机率究竟有多大？“

我觉得莲版主提出这个问题的意义可能是为我们分析抗酸阳性结果时提出了一种可能的假设。出现假阳性不一定仅出现在染色过程中，而是在标本的采集、运送和处理的全过程，若标本接触了自来水处理过的器皿和器械，都有污染非结核分枝杆菌的可能。

茉莉花

原帖由 xiangboshu 于 2007-8-10 14:28 发表

                               
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[quote]原帖由 茉莉花 于 2007-8-8 20:27 发表

                               
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    这个问题想请教一下：“自来水中存在非结核分枝杆菌”在染色的过程中造成假阳性的机率究竟有多大 ...

如果是这样的话，问题又出现了，那么如何区分标本中的结核与非结核分枝杆菌？如何保证这些过程不受污染？想得到一个正确的结果，看来这是很关键的啊。

xiangboshu

通过抗酸染色的方法是无法区分标本中结核与非结核分枝杆菌的，尽管二者在形态上有些微小的差别，但判断的准确性值得置疑。若要区分，就只能做结核菌的培养和鉴定了。要保证标本不受污染，我觉得和微生物的其他标本的采集、运送和处理有很多相似之处，就是要各个环节严格无菌，例如所有的标本都应留取在专用的无菌离心管中。
但我也觉得要保证标本不受污染挺难的，因为我们对标本的采集和运送情况都一无所知，特别是当看到抗酸阳性时，我们也很难断定是结核还是非结核，（要知道在抗酸阳性的标本中非结核的比例占到1/3？），但当我们报到临床时他们一般都是按结核处理的。