本帖最后由 conankillergao 于 2012-3-2 08:11 编辑
实际上04年《内镜清洗技术消毒规范》已经规定出内镜灭菌效果生物学监测的方法：
第三十五条内镜的消毒效果监测采用以下方法：
（一） 采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测。
（二）菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml， 加入2只直径90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45℃-48℃营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35℃培养48小时后计数。
结果判断：菌落数/镜=2个平皿菌落数平均值×20。
（三）致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.2ml分别接种90mm血平皿、中国兰平皿和SS平皿，均匀涂布，35℃培养48小时，观察有无致病菌生长。消毒后的内镜合格标准为：细菌总数<20cfu/件，不能检出致病菌；灭菌后内镜合格标准为：无菌检测合格。
而无菌检验的方法在02版《消毒技术规范》中也有明确规定： 3.17.5.2 无菌检验 无菌检验是指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适合于无菌间查的其它品种是否无菌的一种方法。 无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染；对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。 （1） 无菌检验前准备 1）洗脱液与培养基无菌性试验:无菌试验前 3d，于需-厌养培养基与霉菌培养基内各接种 1ml 洗脱液，分别置 30℃～35℃与 20℃～25℃培养 72h，应无菌生长。 2）阳性对照管菌液制备: ①在试验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种1环至需-厌氧培养基内，在 30℃～35℃培养 16h～18h 后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10 cfu/ml～100cfu/ml; ②取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物1接种环种于相同培养基内，于30℃～35℃培养 18h～24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10 cfu/ml～100cfu/ml; ③取白色念珠菌[CMCC（F）98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1接种环种于相同培养基内，于20℃～25℃培养 24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10cfu/ml～100cfu/ml。 （2）无菌操作: 取缝合针、针头、刀片等小件医疗器械5件直接浸入 6 管需-厌氧培养管(其中一管作阳性对照)与 4 管霉菌培养管。 培养基用量为 15ml/管。 1)取5付注射器，在 5ml 洗脱液中反复抽吸 5 次，洗下管内细菌，混和后接种需-厌养菌培养管(共 6 管，其中 1 管作阳性对照)与霉菌培养管(共 4 管)。 接种量：1ml注射器为 0.5ml，2ml注射器为 1ml，5ml～10ml 注射器为 2ml，20ml～50ml注射器为 5ml，培养基用量：接种量为 2ml 以下为 15ml/管，接种量5ml为 40ml/管。 2)手术钳、镊子等大件医疗器械取 2 件用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样，将棉拭子投入 5ml 无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需-厌氧培养管(共 6 管，其中 1 管作阳性对照)与霉菌培养基(共 4 管)。接种量为 1ml/管，培养基用量为 15ml/管。 （3）培养:在待检样品的需-厌氧培养管中，接种预先准备的金黄色葡萄球菌阳性对照管液 1:1000 稀释 1ml，将需-厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均于 30℃～35℃培养 5d，霉菌培养管与阴性对照管于 20℃～25℃培养7d，培养期间逐日检查是否有菌生长，如加入供试品后培养基出现混浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，可取培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养 48h～72h 后，观察是否再现混浊或在斜面上有无菌落生长，并在转种的同时，取培养液少量，涂片染色，用显微镜观察是否有菌生长。 （4）结果判定:阳性对照在 24h 内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长，如需-厌氧菌及霉菌培养管内均为澄清或虽显混浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格；如需-厌氧菌及霉菌培养管中任何1管显混浊并证实有菌生长，应重新取样，分别同法复试 2 次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。 3.17.5.3 注意事项 （1）送检时间不得超过 6h，若样品保存于 0℃～4℃，则不得超过24h。 （2）被采样本表面积＜100cm2取全部表面；被采样本表面积≥100cm2，取 100cm2。 （3）若消毒因子为化学消毒剂，采样液中应加入相应中和剂。
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