细菌耐药机制与特殊耐药菌检测

清木宜人

细菌耐药性的检测

细菌耐药机制
       产生灭活酶和钝化酶BLA占80%重要性,
          细菌细胞膜通透性障碍或主动泵出,
          抗生素作用靶位的修饰,
          青霉素结合蛋白(PBPs)的改变是革兰阳性菌耐药的主要机制.

与β—内酰胺药相关的耐药性

        MRSA  MRSCON               PBP
        多耐的肠球菌                     PBP
        多耐的肺炎链球菌               PBP
        嗜麦芽假单胞菌                  通透性   酶
        绿脓杆菌                          通透性  酶
        不动杆菌                          酶    通透性
        肺克\大肠                         ESBL
        肠杆菌科                          AMPC

β—内酰胺酶分类及其特征
     结构分类      功能分类     名称                       来源                         代表酶
        (Ambler)     (Bush)

        丝氨酸-Lam
           C                  1               头孢菌素酶              染色体                      Ampc  
           A                 2a              青霉素酶                  质粒                           PCI
                               2b              广谱酶                      质粒               TEM-1,2,SHV-1
                               2be            超广谱酶(ESBLs)    质粒             TEM-3-29,SHV-2-6
                               2br            耐酶拟制剂广谱酶  质粒                 TEM30-61,TRC-1
                               2c             羧苄青霉素酶              染色体          PSE-1,   CARB-3
                               2e             头孢菌霉素              染色体                     Cxase
                               2f             非金属碳青霉烯酶   质粒                ImI-1,NMC-A,Sme-1
          D                  2d             氨唑西林酶              染色体                  OXA-1,PSE-2
                               4               青霉素                      染色体                   Zinc-Lam
          B                   3              金属酶                      染色体                           L1

清木宜人

肠杆菌科细菌对β—内酰胺酶类抗生素耐药的主要机制

        质粒介导的超广谱内酰胺酶“ESBLs”
        质粒介导的头孢菌素酶(AmpC) (90年代以后报道)
        染色体介导的头孢菌素酶(AmpC)



特殊细菌的耐药监测

※MRSA \MSSA\MRS
     由青霉素结合PBP2a蛋白突变形成的
      
       检测方法：1    1ug/片OXA纸片检测或MIC
                           2    琼脂筛选法
                           3    MecA基因检测法


※ VRE的检测
      PBP的低亲和力引起
     检测方法：纸片扩散法确认
          1 :    VanA     壁霉素  R    万古霉素 R
                  VanB     壁霉素  S     万古霉素 R
                  VanC     壁霉素  *     万古霉素 S
           2:   仪器的MIC法.

※PRP的检测

         以OXA纸片显示P-G的敏感性
        若OXA≥19 mm        P-G    S           
        若OXA≤19 mm        P-G的敏感度需用E-test 或  MIC检测

※ ESBL的检测：即超广谱ß-内酰胺酶
          由质粒介导的ß-内酰胺酶TEM、SHV基因的突变产生。
           特点：对三代头孢及安曲南耐药，对酶抑制剂复合物敏感。
           检测方法：
          1 双纸片法：CTD+CL—CTD≥5mm
          2 E-test法：  CTD+CL/CTD ≥4
          3 仪器检测

疑产ESBL的抑菌圈直径

–        抗生素                 抑菌圈直径(mm)

         头孢噻肟                   ≤27
         头孢他啶                   ≤22
         头孢三嗪                   ≤25
         头孢泊肟                    ≤22
         安曲南                        ≤22
         

K-B纸片法筛选敏感性

        抗生素                   敏感性
     
     单头孢他啶              85-89%
     单安曲南                  81-85%
     单头孢噻肟              63-67%
     单头孢曲松              56-59%
    头孢他啶+头孢噻肟  93-96%
    头孢他啶+安曲南      93-96%     

双纸片扩散法（DDT）检测ESBL的方法

§初筛法            
        头孢他啶+阿莫西林/棒酸+头孢噻肟
        两纸片相距20-30mm      有协同作用
§确认法
         头孢噻肟/棒酸—头孢噻肟≥5mm
         头孢他啶/棒酸—头孢他啶≥5mm
         任一项符合为ESBL（+）



ESBL（+）临床报告：ESBL（+）株报告所有的一、二、三代头孢菌素及安曲南耐药，不管其体外敏感与否。

AMPc检测
      ESBL与AmpC酶的特点
        ESBL                             AmpC
        诱导产生                       诱导产生
        质粒介导                       染色体介导
        对三代头孢耐药           对三代头孢耐药
        对酶抑制剂敏感           对酶抑制剂不敏感
        对头霉菌素敏感           对头霉菌素耐药
        部分对四代头孢敏感   对四代头孢耐药

※ β-内酰胺酶试验
      目的：快速使临床获得关于嗜血杆菌、葡萄球菌、淋球菌、卡他莫拉菌的治疗有指导意义。
      β-内酰胺酶（+）预示：
      1：若是嗜血杆菌、淋球菌、卡他莫拉菌则提示P-G、AMP、AM耐药
      2：若是肠球菌、葡萄球菌则提示对青霉素、乙酰基、羧基和酰脲基青霉素耐药

huanluorensheng

总结、归类的很好，让人一目了然。

王冬梅

回复 1# 清木宜人


    学习了，很好，谢谢！

紫色风絮

归纳得比较好，有一点贡献，但有待完善！

拙凌

回复 5# sunage

哪些方面有待完善？您能继续补充吗？

一亩地

这么好的资料，下载后努力学习

刘洪伟

下载学习了，不错！感谢楼主。

芣苢

不是学检验的泪奔呀！！！

阳光一点

谢谢老师分享，路过学习了。