正确使用ATP荧光检测仪用于器械清洗效果的检测

浙江胡

ATP荧光检测仪在器械清洗效果评价方面的使用越来越多了，需要注意几个问题：
1、检测原理是测定细胞中的ATP：ATP是细胞能量的来源，含量较为稳定；荧光素在荧光素酶的参与下与ATP反应生成荧光素氧化产物发出荧光，而荧光强度与ATP的量成正比，因此ATP检测结果间接反映出微生物或有机物的含量。中国CDC研究证实，ATP检测结果与不同浓度的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和血液成直线相关。
2、检测结果的可靠性与检测试剂有关：需要审核试剂的相关研究数据，如跟微生物含量、血液等的一致性。
3、目前有手持机和台式机2种机型：手持机由于检测精度限制只能用于环境物体表面和手卫生的检测，不能用于医疗器械清洗效果的检测；要评价器械的清洗效果只能使用台式机。我们曾在供应室进行比较，用台式机检测阳性（大于2000）的样本，手持机的监测值为0。

Hygiena SUREPlus手持式荧光检测仪

BT-112D台式荧光检测仪

浙江胡

Hygiena SUREPlus手持式荧光检测仪
检测精度：10-15mole ATP
主要用于环境物体表面检测；手卫生检测；餐饮具表面洁净度检测。
仪器的检测精度不够，不能进行器械清洗效果的评价；不能使用ATP标准品进行定量比较。
使用方法：①取出一体化试剂棒，直接在采样表面涂擦（超过100cm2的采100cm2，不足100cm2的全采）后放回检测管；②挤破试剂棒顶端的酶裂解液，使之流入检测管底部浸湿采样棒的棉签；③振摇后将检测管插入检测仪的检测孔；④扣住盖子；⑤按OK键后读数。
推荐评价标准：≤30RLU合格；30-100RLU警告；≥100RLU不合格。
北京奥运会、上海世博会、广州亚运会均招标使用Hygiena SUREPlus手持式荧光检测仪用于卫生安保；北京市医务人员手卫生大比武也使用了Hygiena SUREPlus手持式荧光检测仪进行现场评价（≤30RLU合格，≥100RLU不合格）。

浙江胡

BT-112D台式荧光检测仪
检测精度：10-18mole ATP
主要用于清洗后医疗器械洁净度检测；
使用方法：①采样棒的棉签滴加采样液；②在采样表面来回涂擦（超过100cm2的采100cm2，不足100cm2的全采）；③将采样棒放入含反应液的检测管；④将检测管插入检测仪的检测孔；⑤第一次读数（粗值）；⑥取出采样棒，将标准品放入检测管；⑦第二次读数（标准值）；⑧设备自动计算给出最终结果。
推荐评价标准：≤2000RLU为合格。
北京市2010年医疗质量万里行医疗器械清洗及消毒效果评价采用了BT-112D台式荧光检测仪

浙江胡

关于检测试剂的使用问题
①试剂棒室温下可存放四周（37℃以上可保存二周）；冷藏（4℃）可保存一年；
②试剂盒冷藏（4℃）可保存一年以上；
③从冰箱取出使用前应使试剂棒恢复到室温，不然影响灵敏度。

jironggu

ATP荧光检测法的确是检测环境污染的方法之一：http://www.cdc.gov/HAI/toolkits/ ... olkit-10-6-2010.pdf  但也要注意，

在上述CDC医院环境卫生检测评估方法中指出：该方法并不能区分有机物和微生物，也不能区分活的或已死的微生物。ATP法不能用于检测含氯消毒剂（漂白剂）的清洁效果。

童年快乐

我提意让我们医院卖一台，老师价格大概多少，谢谢

随和好学

用来检测食品的东西，很久以前便有了。

safihu

回复 6# 童年快乐

光是测试条就几十元一条，能用得起吗？

浙江胡

我们买过手持机和台式机，也跟医院供应室合作研究过。
手持机2万左右吧，台式机比较贵8-10万。
一体化的试剂棒好像30元以下吧。
我个人认为这个方法用于检查，不是用于日常监测的。

童年快乐

回复 8# safihu


    只有争取了，才知道结果。

欢乐天空

ATP如果在条件严谨的实验室，验证血液残留的情况，是非常有数据性的科学工具。

从商业角度上，在国外则主要用于食品或化妆品工业的环境评估，做为一个放行的工具，有如CSSD中用于每日放行灭菌器的BD包。

做为清洗效果的验证，固然具备高灵敏度、反应速度快，同时以数值反应ATP含量，不受人的主观影响，但也由于需要专用仪器进行检测、又受到外界影响因素干扰大；温度、表面污染新鲜，以及检测时的环境污染情况等等。特别是ATP仅活在生物体内，随着生物体的死亡，ATP会自然降解而消失。

附件文献中可以了解随着时间的延长，纵然在4摄氏度的血液中存放，20天后相同的测试物(血液)中的ATP也全部消失无踪。

同时，经过85摄氏度水浴后也ATP也会全部降解，然而依据WS310.2操作规范中要求，所有的器械都须经过一定的消毒程序，而主要以湿热物理消毒为主，要求温度与时间恰恰让ATP降解。

这样会形成一个诡调；看着器械上的血液，却查不到ATP值，这样是否会有问题。总结来说，ATP在美国已经使用多年，最初(近10年前)也曾经倡导做为清洗效果的评价，但最终因为验证数据不稳定、ATP残留快速降解等因素，当然也存在价格原因，而没有在CSSD界大量使用。同样地，在欧洲也没以任何CSSD相关的文献(包括规范)有提到。因此是否选择ATP在临床做为CSSD器械清洗效果的评价手段，是有待更多的验证的。

生物發光法監測RBC-ATP含量及血液保存期ATP變化.pdf (93.98 KB, 下载次数: 164)

2011-1-2 11:07 上传

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浙江胡

美国CDC《医疗机构消毒灭菌指南2008》“内镜的清洗消毒”中描述：“评价内镜清洗或内镜处理的效果的新方法（如ATP）已经被评估，但已发表的方法没有作为一个标准来评估内镜处理的结果。”
在关于“清洗”的阐述中：“在过去的几年里，公布的数据显示的是使用人工污物、蛋白质、内毒素、X线造影剂或血迹来检查人工或自动清洗过程，并且用ATP生物荧光法和微生物取样来评估环境物表清洁效果。”

浙江胡

今年去巴西参加第11届世界灭菌大会暨第7届国际灭菌与医院感染控制论坛，会上有专家做了ATP用于清洗效评价的研究报告，评价方法和我们基本一致，所以在“医用清洁剂”国家标准中，ATP是列入的评价方法之一。
我们和医院合作对血液污染后不同存放时间的器械清洗效果进行评价，用放大镜目测法、残留血试纸法、残留蛋白测试棒、ATP进行比较，存放4小时和10小时后ATP检出不合格率和放大镜目测法基本一致，远高于残留蛋白测试棒方法。
北京市年前曾用ATP对三甲医院器械清洗效果进行检查，也发现一些问题。
没有出现前面帖子提到的清洗消毒流程会导致ATP消失，有血渍而检不出ATP这样的问题。
但灭菌后器械用ATP进行检测确实是没有意义的，我看到也有人进行这样的检测评价。

老朽

转帖http://www.nimc.org.cn/sns/home/space.php?uid=392&do=blog&id=2153  连载三篇，有兴趣者打开链接去看看

年前似乎突然間ATP成為一個新的話題，雖然之前有所了解，但也僅僅與國外專家討論時提及，從沒有真正仔細品味過。春節長假在家，好好閉門練功一陣子，在網上發現了很多不錯的資料，順藤摸瓜地又重新看了美國標準AAMI ST79；滅菌標準。在附錄中發現了太多的東西是以前忽略的，所以節後這兩三周，透過公司的資源把這些過外資料好好整理了下，放到日誌中與各位老師分享，希望透過一個科學的討論，把ATP這個工具好好運用到正確的方向，有著良性循環才能讓原本稀少的醫療資源發揮到極致。

Exploding the myths about ATP hygiene monitoring

破除ATP卫生监测的神话

There are several misconceptions regarding the application of ATP bioluminescence for hygiene monitoring, and this article will address the issues. 关于ATP生物冷光反应技术(ATP bioluminescence)应用在卫生监控上有几个错误概念，本文将针对这个议题作讨论。



There is little doubt that the application of ATP bioluminescence for hygiene monitoring applications is widely recognized as an effective test for hygiene and the verification of cleaning procedures.  The broader benefits of 25 – 50% on cleaning chemical, improvements in product quality and shelf life, the previsions of data for real time trend analysis and evidence of due diligence.

The technology and application has been in use for over 30 years and there are many publications on the subject (Griffith et al 1997: Dillon & Griffth, 1999; Illsey et al., 2000).

Senior technical professionals from leading independent organizations around the world concur that the ATP test is a direct, objective method that detects product residues on surfaces, and that the test is not intended to be a direct replacement for the traditional cultural microbiological test.  Put simply, ATP hygiene monitoring is a product residue test, not a bacteria test. 毫无疑问地，ATP生物冷光反应技术普遍被认为是一个可用于卫生及清洁步骤监测的工具。这种快速替代测试的好处还包括降低25 - 50％的化学洗剂成本、改善产品质量和保存期限、提供实时趋势分析的数据、以及实质审查的证据。

        这项技术及其应用已使用了30多年，且有许多关于这个议题的出版品(Griffith 等人 1997; Dillon & Griffith, 1999; IlIsey 等人., 2000)。

        世界各地领先独立机构的高级技术专家一致赞成ATP测试是一个直接的，客观的方法，可用于检测表面的产品残留物，而此测试方法并不打算成为一个直接替代传统微生物培养的检测方式。简单地说，ATP的卫生监测是一个产品残留物的检测，而不是细菌检测。



What is ATP hygiene monitoring? 什么是ATP卫生监测？

The method uses the enzyme luciferase to convert a chemical compound (Adenosine Triphosphate, ATP) into a light signal which is measured by the instrument that gives results in Relative Light Units (RLU). The enzyme is very specific for ATP only and does not detect ADP or AMP. The test is very sensitive (limit of detection is typically 10-15 mols ATP), gives results in seconds that are linear, repeatable and reproducible. However the test is a biological assay and is therefore inherently more variable (lower precision and accuracy) than that a chemical assay. Sample distribution and collection can have a significant impact on the results. It is important to understand the sources of error to obtain reasonable expectations of the test results, particularly when comparing different systems. 该方法使用冷光蛋白酶将化学化合物（三磷酸腺苷，ATP）转换为光信号，仪器测量后得到冷光强度，以相对光单位（Relative Light Units ，RLU）表示。这种冷光蛋白酶只对ATP有特异性，并不会侦测到 ADP(。此检测方式的敏二磷酸腺苷，简称ADP)或AMP(一磷酸腺苷(腺嘌呤核糖核苷酸，简称AMP)( http://baike.baidu.com/view/37286.htm )感性相当高（检测极限一般是10-15莫耳的 ATP），在几秒钟内便可得到线性的、具有可重复性及可重现的结果。然而，此检测方式是一种生物检测，与化学检测法相比，其本质上变异性较大（低精密度和准确度）。样本分布和收集对结果也具有重大影响。重要的是要知道的误差来源为何，以得到合理预期的测试结果，尤其是在比较不同的系统时。



ATP is the universal energy carrier and is found in all living organisms from the food we eat, our own body fluids and micro-organisms. The ATP content of foodstuff and body fluids is very large (usually millions of times greater) than that of micro-organisms. This is largely due to the size differences but is also a function of metabolic condition.  ATP是一种普遍的能量载体，存在于所有生物体中，举凡从我们吃的食物，我们的体液和微生物中都有这种物质。食品及体液中的ATP含量相当多，通常比微生物高出约一百万倍。这主要是由于体积大小的不同，但同时也表示一个代谢状态的作用。



        The ATP hygiene test detects ATP from all sources and cannot differentiate ATP from different sources. Contamination (organic matter or microbes) are not evenly distributed on product contact surface. Accordingly, the ATP hygiene test should not be considered as an absolute, precise measurement of surface contamination. It is a sophisticated sensitive indicator test of hygienic status and potential risk. ATP卫生测试会侦测到各种来源的ATP，因此无法区分不同来源的ATP。污染（有机物或微生物）并非均匀地分布在产品接触表面。因此，在检测表面污染时，ATP卫生测试不应被视为是一个绝对的、精确的检测。它是在评估卫生状态及潜在风险时，一个复杂且敏感的指标。

Is there a relationship between the ATP test result and microbial numbers on food production equipment? Yes but it is a coincidental relationship. The primary purpose of cleaning is to remove product residue for product contact surfaces. Effective cleaning simultaneously removes the material capable of supporting microbial survival and growth, as well as many of microbes themselves. Accordingly there will be direct relationship between ATP hygiene monitoring and microbial enumeration as methods. This coincidental relationship cannot be expected to be 100% because both methods are measuring different analyses and both are variable biological tests. Some published data shows 80-90% agreement whereas other data shows 67%agreement (see Table 1) due to the presence of product residues that are not detected by the microbial test. 在食品生产设备上，ATP的检测结果与微生物的数量是否具有相关性？  是的，但它们之间的相关性只是一个巧合。清洁的主要目的是去除产品接触面的产品残留。有效的清洁能够同时去除让微生物存活、生长的物质，以及微生物本身。也因此，ATP的卫生监测和微生物计数的方法间将会有直接的相关性。这种巧合的关连性并非100%，因为这两种方法都是在侦测不同的被分析物，且两种方法都是具有变异性的生物测试。有些公布的数据显示这两种方法有 80 - 90％的一致性，而其他数据显示有67％（见表 1），那是因为产品残留物没有被微生物检测法侦测到。



Accordingly the ideal test to measure cleaning efficiency is a product residue test that gives rapid results so that corrective action (e. g. re-cleaning) can implemented immediately in support of GMP and HACCP. This is what the ATP hygiene test delivers. 因此检测清洁效力的理想测试方法是产品残留物测试，它可提供一个快速的结果以便立即更正清洗过程(如重新清洗），以符合GMP和HACCP的规范。这就是ATP卫生检验所提供的正确用途。

clarck7

学习了！正在琢磨ATP如何运用呢！

王士心

回复 5# jironggu


    是的，ATP检测目前只在清洁度检测中使用，国外也用于细胞计数、细菌细胞计数、以及制药研发中的药敏试验。当然在做细菌细胞计数时要排除其他atp  的干扰。

王士心

回复 1# zjhu


     从科学的角度来讲，ATP在细胞内是动态平衡，由ATP降解到ADP再到AMP，在细胞线粒体中又合成ATP。在细胞自然调亡的情况下，ATP降解的速度大于合成速度，造成ATP的衰减。但在我们实际应用中，器械使用完不会放置24天才去清洗。一般细胞在体外有不同的存活时间。
   另外，死亡的细胞当中还会残留ATP，这些从细胞内融出的ATP物理性质非常稳定。我们曾经将ATP纯品100度下30分钟水浴未见太大变化。在器械清洗时表面活性剂将细胞融开，此时的ATP具有较好的稳定性。
   游离的ATP与残留蛋白有很好的结合（蛋白质上有专门结合ATP的位点），因此ATP检测比蛋白更灵敏。

王士心

回复  

     ATP检测技术发展至今天比90年代的研究有了长足的进步和发展，目前高端设备已经可检测到1O^-18至10^-21摩尔的水平，检测试剂也可达到5细菌细胞的水平。任何检测技术和方法都不是完美的，只要合理使用该技术肯定是院感监测的好帮手。如果真像11楼的专家所说该技术如此不稳定，那么这么多年制药行业的药敏研究、食品行业的HACCP管理专家岂不是在做无用功。

王士心

回复 1# zjhu


    正如楼主介绍的一样，不同的检测对象选用不同灵敏度的设备：
  手持式ATP检测仪：
        用于手卫生的清洗效果和重点科室的物表的清洁效果
   台式ATP检测仪:
            用于复用器械清洗效果和医疗用水。

王士心

回复 1# zjhu


    楼主在吗想请教个问题