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产NDM-1细菌的实验室诊断包括筛查、表型确认以及分子确证实验三个步骤。 1、表型筛查试验:在细菌药物敏感性测定中,以美洛培南或亚胺培南纸片法(K-B法)或最低抑菌浓度(MIC)测定法对肠杆菌科细菌产酶情况进行初步筛查,如果达到以下标准,应怀疑细菌产碳青霉烯酶,需要进行性表型确认。厄他培南特异性较低,不推荐用于筛选试验。 a)K-B法:美洛培南(10μg纸片)抑菌圈直径≤23mm或亚胺培南(10μg纸片)抑菌圈直径≤21mm时,需要进行表型确认。 b)最低抑菌浓度(MIC)测定法:美洛培南MIC≥0.5mg/L时,需要进行表型确认;对大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙门菌属和肠杆菌属,亚胺培南MIC≥2mg/L时,可进行表型确认试验。 2、表型确证试验:采用亚胺培南+EDTA复合纸片或E试条,进行KB法药敏试验或MIC测定,如果复合纸片比单药纸片的抑菌圈直径增大值≥5mm,或单药与复合制剂的MIC比值≥8时,判定产金属β-内酰胺酶,需用分子生物学技术进行酶型确认。 3、酶型分子确证试验:采用NDM-1的基因特异引物进行PCR扩增及产物测序,确定菌株是否携带NDM-1基因。 在NDM-1实验室诊断中,需要注意质量控制,推荐美洛培南作为表型筛选与确证用抗菌药物,各医院实验室可进行PCR扩增初步确定细菌产酶情况,对阳性结果须加以复核,同时菌株送有条件参考实验室进一步检测确定。 (以上内容,由浙江大学医学院附属一院的肖永红教授提供) |