本帖最后由 海内知己 于 2010-9-14 16:35 编辑
附件1 病原学检测方法 （厚血膜法）
一、血片制作 于晚9时至翌晨2时，以皮肤消毒剂消毒耳垂（或指端）待干，用一次性采血针快速深刺，取血6大滴，约等于120μl，涂于2张玻片，制成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形厚血膜（约长3cm、宽1.5cm），平放于有盖的玻片盒内。 二、血片染色 将经自然干燥的血片放入清水中溶血5分钟～10分钟，至血膜呈乳白色，取出晾干，用甲醇固定，染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色，鉴定虫种或保存标本宜用吉氏液或苏木素染色。 （一）硼砂美蓝染色法。取美蓝2g，硼砂3g，置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中，加蒸馏水100ml配成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5ml加清水配成5％稀释液，染3分钟～5分钟，使血膜呈天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。 （二）吉氏染色法。染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25ml及甲醇25ml配成。先置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后移入带玻璃塞的100ml玻塞瓶内，用甲醇小量多次洗涤甘油染液移入瓶内，盖紧瓶盖，充分摇匀，置于55℃—60℃温箱内24小时或室温下3天—5天，即为原液，放置愈久染色效果愈佳，临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1分钟，然后滴加10％染液（原液加清水稀释配成）染色45分钟，用蒸馏水轻轻冲洗。 （三）德氏苏木素染色法。染液由A液即铵明矾饱和液（铵明钒20g、蒸馏水100ml）、B液（苏木素结晶1g加纯酒精10ml）、C液（甘油25ml加甲醇25ml）配成。将B液逐滴加入A液中，倒入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加入C液，密封备用。血片溶血、固定步骤同前。用上述染液染色10分钟～20分钟，用0.05％—0.1％稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。
三、血片镜检 将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数，根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，予以确定。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构，以鉴别班氏和马来微丝蚴。必要时用油镜作进一步鉴别。 四、班氏与马来微丝蚴形态鉴别要点 特 征 | 班氏微丝蚴 | 马来微丝蚴 | 长度（μm） | 244～296（平均260） | 177～230（平均220） | 宽度（μm） | 5.3～7.0 | 5.0～6.0 | 体态 | 柔和，弯曲自然，无小弯 | 僵直，大弯上有小弯 | 头端空隙（长宽比） | 较短(1 ：1) | 较长（2 ：1） | 体核 | 圆形，排列整齐，各核分开，清晰可数 | 卵圆形，大小不等，排列紧密，常相互重叠，不易分清 | 尾核 | 无 | 2个 |
附件2 血清学检测方法
一、快速免疫色谱试验（ICT）检测班氏丝虫抗原 （一）试剂盒内容物（置4℃可保存6个月）：含测试卡和100µl刻度毛细管。 （二）血样：全血100µl。 （三）操作步骤。 1.打开测试卡, 移去并丢弃粘胶衬里, 确保卡的右手边缘粘胶是暴露的。 2.利用毛细管的虹吸作用，从耳垂或手指取血，使毛细管内血量吸至100µl刻度线。 3.将100µl全血从毛细管加到测试卡粉红色和白色垫的顶部。注意每一滴血完全吸收后再加第2滴。如毛细管内的血滴出不畅，可将管尖轻按垫子。 4.等垫子的粉红色部分完全浸透血清（约需30秒～1分钟）后关闭测试卡。如在1分钟～2分钟垫子的粉红色部分仍未能浸透血清，应加1滴试剂。用力压紧测试卡视窗右边区域，并开始计时。 （四）结果判断标准。 关闭测试卡2分钟后，通过测试卡视窗读结果。若在视窗内见到2条线（对照线和测试线），则结果为阳性；如只有对照线显示，则结果为阴性。如是弱阳性血样，可延长显示时间至关闭测试卡15分钟时再做记录，以确定结果。如果对照线不显示，则测试无效，应当重新进行测试。读卡时间最长限在15分钟，长时间放置，阴性多会变成阳性。 注：ICT测试卡不适用于检测马来丝虫病。 二、ELISA检测丝虫特异IgG4抗体试验 （一）试剂盒内容物（置4℃可保存6个月）：含丝虫抗原包被板、抗人IgG4酶结合物、洗涤剂干粉、底物稀释液、底物干粉、反应终止液、阴性对照、阳性对照。 （二）血样（血清或滤纸血） 1.血清：采集受检者的静脉血或末梢血，离心后收集血清。在低温下运送，4℃保存，–20℃可长期保存。 2.滤纸血：以洁净滤纸沾取自然流出的一滴耳垂或手指血（约20µl），血斑直径应在1.1 cm～1.2cm，厚薄均匀。自然干燥后密封置4℃保存（可保存约6个月）。 （三）操作步骤。 1.将每袋洗涤剂干粉用500ml蒸馏水溶解作反应板洗涤液和样品稀释液用。血清样本按1：40稀释，滤纸血样本按直径1.1cm圆片加400µl样本稀释液，37℃浸泡2小时（或4℃过夜）稀释处理。 2.取已稀释的样本100µl加入反应板孔内，同时设阴性、阳性对照（阴、阳性对照已稀释，直接加入100µl）及空白对照（加100µl样本稀释液）各1孔，37℃反应90分钟后甩去孔内液体，用洗涤液加满各孔，静置30秒后甩去，共洗5次，最后一次拍干。 3.除空白对照孔外每孔加抗人IgG4酶结合物2滴，37℃反应90分钟后甩干孔内液体。同上洗涤。 4.将底物干粉完全溶解于底物稀释液中（底物溶解后4℃避光可保存1周），各孔加入底物溶液2滴，37℃30分钟后加1滴终止液终止反应，混匀，观察结果。 （四）结果判断标准 1.肉眼观察：当阴性对照孔无色或显微黄色，阳性对照孔呈明显黄色时，试验有效。待检样品孔颜色呈明显深于阴性对照的黄色即判为阳性。 2.仪器检测：应用酶标仪以空白对照孔调零，在波长405nm处读取各孔OD值。以样本OD≥阴性对照OD值的2.1倍为阳性，若阴性对照OD值不足0.07，按0.07计算。 注：IgG4抗体试验适用于检测班氏丝虫和马来丝虫病。 附件3
丝虫病个案调查表 一、一般情况 姓名： ；性别： ；出生年月： 年 月。 固定电话： ；手机： 。 现住址：
省 市 县（市、区） 乡（镇/街道） 行政村（居委会） 自然村。 原居住地： 省 市 县（市、区） 乡（镇/街道） 行政 村（居委会） 自然村。 原居住地是否有丝虫病的流行？是=1，不是=2，不清楚=3。
近年服务单位： ；单位电话： ；联系人： 。
曾去过的国家或地区： ，1.外出时间：
年 月 日 至 年 月 日。2.外出时间： 年 月 日 至 年 月 日。 二、是否做过微丝蚴检查： 查过=1，未查过=2，记不清=3。
如果查过: 最后一次的检查时间是:
年
月。 检查的结果是: 阳性=1，阴性=2，记不清=3。
三、是否服用过乙胺嗪：服过=1, 未服过=2, 记不清=3。
四、近一年中，是否有以下症状或体征（可多选）: 急性淋巴管/淋巴结炎=1，淋巴水肿/象皮肿=2，乳糜尿=3，鞘膜积液=4，无=5。
五、此次病原学检查时间：
年
月 日 。 病原学检查结果：班氏丝虫=1，马来丝虫=2；阴性=3。
微丝蚴密度： 条/120µl。
调查人： 调查时间： 年 月 日
附件4 蚊媒分类调查表
省
县(市、区)乡（镇/街道） 行政村（居委会） 自然村
捕蚊日期 | 中华按蚊（只） | 嗜人按蚊（只） | 淡色库蚊（只） | 致倦库蚊（只） | 其他蚊种（只） | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
捕蚊者 日期: 年 月 日 鉴定者
日期: 年 月 日
附件5 蚊媒幼丝虫自然感染调查表
省 县(市、区)乡（镇/街道） 行政村（居委会） 自然村
阳性蚊序号 | 捕蚊日期 | 阳性蚊幼丝虫解剖结果 | 备注 | 中华按蚊 | 嗜人按蚊 | 淡色库蚊 | 致倦库蚊 | 腊肠期条数 | 感染前期条数 | 感染期条数 | 腊肠期条数 | 感染前期条数 | 感染期条数 | 腊肠期条数 | 感染前期条数 | 感染期条数 | 腊肠期条数 | 感染前期条数 | 感染期条数 | 1 | | | | | | | | | | | | | | | 2 | | | | | | | | | | | | | | | 3 | | | | | | | | | | | | | | | 4 | | | | | | | | | | | | | | | 5 | | | | | | | | | | | | | | | 6 | | | | | | | | | | | | | | | 7 | | | | | | | | | | | | | | | 8 | | | | | | | | | | | | | | | … | | | | | | | | | | | | | | |
捕蚊者 日期: 年 月 日 鉴定者 日期: 年 月 日 解剖者 日期: 年 月 日 镜检者 日期: 年 月 日 | 
发表于 2010-9-14 15:24
