如何去选择鲎试剂和内毒素检测方法？

胡杨

新的2010版《----操作规程》明确了每3个月做一次内毒素检测。各位院感人都有建立和熟悉内毒素检测方法的过程。过去凡是医院药剂科制备灭菌制剂的，对内毒素检测并不陌生。但对于来自不同行业的院感人，可能有些茫然，不知道如何下手。许多人咨询我，内毒素检测，怎么做？谁来做？需要什么仪器设备？试剂怎么买？等等疑问接踵而至。我建议大家去药剂科咨询，有条件看些相关资料。下面，就相关问题逐一总结上传，供初入门的人员参考。

如何去选择鲎试剂和内毒素检测方法？
-内毒素检测新手必看

    显色基质鲎试剂、凝胶法鲎试剂、特异性鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、比色法鲎试剂、显色法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、浊度法鲎试剂 、动态比浊法鲎试剂、弃G因子鲎试剂、终点显色法鲎试剂...。如果你是一位刚准备做内毒素检测的工作人员，看到有这么多种鲎试剂，是不是有个疑问：“这么多种鲎试剂，我该怎么选择呢？”别急，不要被这么多名字吓到了，以下为您详细分类介绍：

一、什么是鲎试剂。
    鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。

二、鲎试剂的分类：
1、按原料来源分：
    全世界有5个种属的鲎，其中仅有中国鲎(又名三刺鲎）Tachypleus tridentatus Leach和美洲鲎 Limulus polyphemus Linnaeus可制造鲎试剂，对应生产出来的鲎试剂分别为中国鲎鲎试剂（Tachypleus Amebocyte Lysate），缩写为TAL；美洲鲎鲎试剂（Limulus Amebocyte Lysate），缩写为LAL。TAL与LAL有相同的功效。

2、按检测方法分：
    中国药典2005年版中收录了2种细菌内毒素检查法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。

三、鲎试验的内毒素检查方法
    细菌内毒素检查法详见05年中国药典附录。【论坛内有相关介绍，请搜索】。

四、内毒素的检测原理：
1、凝胶法：系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量，使用时应加无热原水（细菌内毒素检查用水）复溶后使用。2005年版药典中凝胶法鲎试剂结果的判断：保温60分钟±2分钟后观察结果。部分商家所说的半小时出结果的快速凝胶法鲎试剂是没有依据的，没到时间就观察结果可能导致假阴性。特异性鲎试剂（又叫弃G因子鲎试剂）是凝胶法鲎试剂的一种，细菌内毒素及β-葡聚糖均能与鲎试剂发生凝聚反应。特异性鲎试剂就是屏蔽β-葡聚糖引起的鲎试剂凝聚反应，使鲎试剂仅与内毒素起反应。一般中草药注射液成份复杂，干扰因素较多，常含有β-葡聚糖或内毒素类似物。用特异性鲎试剂能减少或消除假阳性反应。（应做对比及干扰试验）。

2、光度测定法：

    光度测定法又分为浊度法和显色基质法，这2种方法都是定量检测内毒素的方法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，可分为终点浊度法和动态浊度法。终点浊度法未见已商品化产品，不再赘述。动态浊度（比浊）法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

    显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，因使用分光光度计或酶标仪器，又称为比色法。根据检测原理，分为终点显色法和动态显色法。国内已有显色基质鲎试剂盒(终点法)，早期有上海伊华以鲎三肽为原料做成的鲎试剂盒，厦门鲎试剂厂于2005推出以鲎四肽为原料的鲎试剂盒，也有少量国外产品，但到货周期长，价格远高于国产试剂。动态比色法与终点比色基本原理差不多。国产暂无动态比色法，相信很快就会面市。

五、方法与试剂选择：
    如果您仅需要检测样品的内毒素限量，则应选择凝胶法鲎试剂，通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数，做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。
    如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂或动态浊度法鲎试剂。动态浊度法鲎试剂一般需要配备专用的动态浊度仪或带有特定软件的酶标仪，比较适合样品量较多的用户。（显色基质鲎试剂用酶标仪或分光光度计检测。是样品数较少（少于200-300个），设备比较简陋的用户。如果已有内毒素检测专用酶标仪，则可选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。
    最后小结：鲎试剂就分定性和定量2种，定性就选凝胶法（特殊产品用特异性鲎试剂）。定量就是显色法鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂（根据已有仪器条件来定）。如果有动态比色法鲎试剂那就多一种选择（当然要看你的投入成本）。
    相信通过以上介绍您对鲎试剂已经有一定了解，聪明的你一定知道如何去选择鲎试剂了吧！

亦假亦真

学习了。谢谢胡杨老师这么晚还上传帖子

helena0506

已下载学习，谢谢胡杨版主……

瑶瑶

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宝安6

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花好月圆2014

谢谢胡杨老师的讲解，对鲎试验有了初步的理解！医院血透用水内毒素检测用凝胶法方便一些吧，再不知道那仪器要多少钱？

hejing

就是阿，我们也正开展血透工作，正想了解这些

pausees

学习了，谢谢老师。

JGY13776505863

谢谢老师分享，正好需要这方面的资料。

守住1.份堅持°

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5110241977

路过学习了，谢谢老师的分享。

乐多。

感谢老师的无私分享，写的很详细，学习到啦

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学习了。。。。。。。。。。。。。。。。

小云朵

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