微生物感染的病原学检查

菊天使

微生物感染的病原学检查可查明标本中的病原微生物并对其进行种属鉴定，必要时进行药物敏感试验和毒力检查等，从而协助医生对感染性疾病进行病因学诊断、指导合理用药或观察治疗效果。
   微生物感染的病原学实验室诊断方法大致包括：
①光学显微镜对标本或组织中的病原体的形态学检查；
②病原体的分离培养和鉴定；
③用免疫学技术对病原体抗原或相应抗体的检测；
④用分子生物学方法对病原体特异性基因的检测。

标本的采集与送检是微生物学检查的第一步，方法的正确与否直接影响病原体的检出率，因此应注意以下原则：  
1．采集标本时应无菌操作，尽量避免污染；盛放标本的容器和培养基应预先进行无菌处理并贴好标签；
2．应选择感染部位或病变明显的部位采集标本，避免周围组织、器官或分泌物中的杂菌污染。例如感染性伤口，应从其深部而不是从表面采集标本；若采集龈沟液检查口腔厌氧菌，应将无菌滤纸条深入龈沟中，停留数秒后取出；怀疑细菌性痢疾时，应采集有粘液或脓血的粪便；采集病毒的标本应尽量含有感染的细胞。
3.根据病原体在感染性疾病的不同时期的体内分布和排出部位选择在最佳时间采集适宜标本。例如，可疑伤寒的病人， 在病程的1～2周内取血液，2～3周时则取粪便或尿液送检；怀疑流行性脑膜炎的病人，应选取脑脊液、血液或皮肤上的出血淤斑进行检测；如果进行病毒培养或其抗原检测，一般应取急性期标本，标本采集越早，病毒的阳性检出率高。
4.对于怀疑细菌感染的标本，尽量在抗生素使用前采集，特别是对抗生素敏感的病原体，如乙型溶血性链球菌、脑膜炎奈瑟菌。病毒对抗生素不敏感，故无此限制。而且用于病毒分离培养的标本应加入抗生素，以避免在病毒培养过程中细菌污染。
5．检查病原体的特异性抗体IgG时，应采集急性期和恢复期双份血清，只有当恢复期血清抗体效价比急性期的效价明显 升高达4倍或以上时，方有诊断价值。检测血清特异性抗体的标本应保存在-20℃.
6．标本采集后应及时送检。大多数细菌标本应冷藏送检，但是某些细菌，如脑膜炎奈瑟菌对低温和干燥极其敏感，应意保温，尽量床旁接种，并预温相应的培养基。病毒在室温中易于灭活，应立即接种；如需运送，以4℃为宜；若需保存较长时间，加入适当的保护剂如甘油或二甲基亚砜后，放入-70℃保存。

白杨树

认真阅读完毕，谢谢！但是＂尽量床旁接种＂基本上还是做不到的．

巴斯德之徒

不知楼主写这个有什么用意？文章的内容似乎是从某篇文章、PPT或者著作中拦腰截取的.....但似乎想表达的意图又没有完整的呈现。
当中插的玩艺儿被我删了不会介意吧！

左小玲

请教各位老师，急性兰尾炎手术病人血培养结果检出肺炎克雷百氏菌，我们如何判断是否院内感染？儿科新生儿患者血培养检出鲍曼不动杆菌？如何诊断？血培养阳性就是血液感染吗？不好意思，因为我们刚建立细菌室，很多东西都不懂，请各位赐教，谢谢！

巴斯德之徒

请教各位老师，急性兰尾炎手术病人血培养结果检出肺炎克雷百氏菌，我们如何判断是否院内感染？儿科新生儿患 ...
左小玲 发表于 2010-3-12 16:14

                               
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血液中分离出细菌在可排除污染的情况才能确定为感染菌。如果你们只送检了单瓶血培养，而且病人症状和正在使用的抗生素与药敏结果不符合的时就要怀疑污染。
当然，就细菌本身而言，无论肺克还是鲍曼都被大量文献报道导致败血症，甚至爆发流行也有报道。但不等于该菌只要从血液中分离到就一定有意义，除非是鼠疫耶尔森菌、炭疽芽孢杆菌等烈性传染病菌，或者在人体皮肤，环境中不存在的细菌如脑膜炎球菌、淋病奈瑟菌、肺炎球菌、流感杆菌等。除此之外，对于血液分离的所有细菌均需要进行判断，以排除污染或者确认机会感染。

冰上芭蕾

请问你们医院耐药检验的药物品种由谁决定？多从耐药的检验方法是什么？为什么我们医院检验科说多重耐药菌检测试剂全国都没有正式批号，谁做谁违法呢？谁能告诉我。

巴斯德之徒

请问你们医院耐药检验的药物品种由谁决定？多从耐药的检验方法是什么？为什么我们医院检验科说多重耐药菌检 ...
冰上芭蕾 发表于 2010-3-13 09:43

                               
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整个细菌耐药的检验是通过药敏实验来完成的，多重耐药的定义也是根据药敏实验结果分析得出的。至于选择那些药进行检测有专门的机构制订专门的行规来规范，这个机构就是CLSI，一个国际性的权威机构。除此之外，在英国、法国、德国也有自己国家的制订的规范，与CLSI精神、内容、方法学基本一致，只是涉及的细菌种类更宽些。亚洲国家只有日本制订了自己的药敏规范。其他国家几乎完全照搬CLSI的全套规范。   
而耐药机制的检测也大多在CLSI基础上展开，研究比较透彻的机制已被CLSI收录并加以规范并倡导，正在研究中，尚不是很成熟的方法则根据各个国家各个地区自己的能力水平经济实力自己酌情开展，一般需要分子生物学的参与。

所以，对于你们医院的这些问题首先是要在CLSI的大原则下，符合药理学、微生物学，在此前提下结合你院实情进行细微调整——这种调整一般需要微生物室、临床医生、药剂科、院感科等相关人员共同参与制订，院长签署后执行。对于多重耐药菌检测的问题很多常见的CLSI已经有相关规定，例如MRSA、ESBL、VRE、MLSb、KPC、PRSP等，这些都是要求必须检测的；其他的如AMPC、金属酶、VRSA/VISA根据自身的条件酌情处理，不必强求。

对于用于特殊多重耐药菌检测的试剂国产的的确有很多都没有去拿证，可能是国家自身的问题，也是生产厂家的问题。但还是有些是有证的。不过进口试剂就很多都是有证的。
有部分耐药菌例如MRSA、PRSP、ESBL等自动化仪器的配套耗材已经设计了这些机制的检测功能不必另外进行，而且试剂都是有证的，完全能满足需要。而有些检测是通过特殊方法进行的，不是由试剂决定的，例如KPC酶。其他如AMPC酶、金属酶的检测也大多属于这种情况。所以不存在谁做谁违法的事。卫生部是倡导开展特殊耐药菌制检测的，而不是要通过拿证之类的手段逼迫大家不去开展。这点必须明确。

冰上芭蕾

非常感谢您的指教，我是临床出生的院感人员，对微生物检测方面知识比较陌生，CLSI我如何能找到呢。我院药敏试验品种不确定，基本是检验科随意定，临床医生有意见但不知如何提出才能说服检验科主任，药局对此不感兴趣，只有院感科着急。多重耐药菌检测至今未开展，逼迫我必须成为微生物方面专家。

巴斯德之徒

非常感谢您的指教，我是临床出生的院感人员，对微生物检测方面知识比较陌生，CLSI我如何能找到呢。我院药敏 ...
冰上芭蕾 发表于 2010-3-13 19:00

                               
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CLSI是每个微生物室所必备的专业文件，就如同临床医生手头的各种疾病诊断指南一样，又如同卫生部下发的《抗菌药物临床应用指导原则》一样，它是一个微生物室进行药敏试验的行为指南。

在《全国临床检验操作规范》第三版上就收录了CLSI M100-S16 (2006) 的规则，只要是检验科就肯定有这本书，对于不同细菌到底应该选用哪些抗生素，其指导原则在该书第892~896页被收录，上面同样收录了部分耐药菌的检测方法。CLSI规则每年都在更新和补充，目前CLSI已经更新到M100-S20E，在本论坛和微生物之家论坛都有下载资源，你可以下载后自己先看看——如果看不懂就找微生物室真正懂行的给你讲讲。然后拿着他去找检验科主任，让他也学习学习——顺便告诉他不仅要当官，还要懂业务，更应该懂法，知道什么是行业规范，做事不能天马行空，要用专业指南规范日常工作和行为。

你可以抱着这两本资料——“检验科行为指南”和“微生物室行为规范”去找你们院长，让他迫使检验科就范。当然也要让临床医生学习CLSI，不要给微生物室提出一些违反基本原则的无理要求。

巴斯德之徒

回复 8# 冰上芭蕾

    “多重耐药菌检测至今未开展，逼迫我必须成为微生物方面专家。”

    尽管非常希望、甚至盼望从事临床的老师成为 微生物学方面的专家，但目前的情况看来由于分工 不同，专业所限还是不要去充这个专家的好。不过学习和了解是需要的了。

    之所以这样说，是由于微生物学是一门非常专业，并且需要一定专业基础和长时间学习才能入门的学科，即使是检验人员也不可能都精通微生物学，还不要说是临床医生或者护理人员——由于我国的医学教育体制本身的毛病导致临床医生基础课根本不扎实，对微生物学、药理学这些原本应该精通的基础课程却知之甚少。很严重的影响了作为临床医生所从事的临床工作，但现实终归是现实，在目前看来最实际还是和检验科，尤其是微生物室通力合作为好。
    其实，微生物室的老师还是多数好学的，只是在检验科众多实验室中实在有苦难言，所以，作为院感科应该了解这点，给与他们帮助和扶持才能让他们心甘情愿的用自己的专业来协助你们的工作。不要鄙视他们，更不要对微生物室的老师指手画脚，抱以责怪的态度，他们的工作也许的确存在不足，但从内心来说他们是希望改进的，只是苦于报国无门而已。要改进他们的工作也不是光有压力就行了的，还有让他们有动力，有后劲。为了可持续发展，选送一批爱好微生物学，有前途的年轻人到微生物室搞得比较好的上级医院进修1~2年，然后每年专门安排微生物室人员外出学习。定期组织微生物学专业考试，让他们在压力下产生动力，在政策鼓励下激发工作热情，这样才是搞好微生物室的正确做法。
    微生物室好起来了院感科的工作才能真正好起来，你们才真正能在院感这块领域做出成绩来。院感科和微生物室是医院感染控制的“两条腿”，缺了谁都走不了路！

冰上芭蕾

再一次感谢版主的指教，您说的太好了，我会将您的话转告院长，希望他能理解我们的工作，希望他能认识到我院检验科存在的不足，能想办法解决问题。能明白做这个工作不是支持院感科工作，而是尽医院感染管理责任。

左小玲

回复 9# 巴斯德之徒


    谢谢版主的指教，以后一定多向专家请教。

高山雪莲W

巴斯德之徒 发表于 2010-3-13 22:47

                               
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回复 8# 冰上芭蕾

    “多重耐药菌检测至今未开展，逼迫我必须成为微生物方面专家。”

版主的这番话，令人感动，您说的非常对，我接触的微生物室的人，非常认真敬业，我与他们合作非常愉快，他们积极主动配合院感科工作，经常主动与我沟通，在病原学检测方面开展了许多新业务，尤其耐药菌检测，第一时间告诉临床与院感科，主动提供临床有价值的参考意见，临床对微生物室信任度大大提高。
您说的非常对：“微生物室好起来了院感科的工作才能真正好起来，你们才真正能在院感这块领域做出成绩来。院感科和微生物室是医院感染控制的“两条腿”，缺了谁都走不了路”！