怎样对空气中金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌进行采样监测？

苏州

问各位同仁：
在卫生部《消毒技术规范》（2002年版）中，对医院的Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类环境中，不得检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌。  
     那么我们在平时监测中，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌的监测采样是否需放置血平板？如果是的话，到底要放置多少块血平板？因为在卫生部和国家GB标准中都未提到需放血平板和具体放置血平板的数量进行采样监测。
   各家医院又是怎样进行监测金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的？望能提供各家医院合理科学的监测建议。
                                                                            谢谢！

txzhou

如果要检测金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌就应该用血平板，具体放置几块应根据采样的面积计算。
我们医院所有的环境微生物检测都用血平板，看到有疑似金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌的菌落，做个简单的鉴定。

风平浪静

《医院消毒卫生标准》（GB15982-1995）有关于采样监测的具体方法，30平方以下的空间一般放三个平板，成对角线放置，如果大于30的按照平方分东南西北中五个方位放置，距离地面和墙壁都有明确的要求。

风平浪静

《医院消毒卫生标准》（GB15982-1995）有关于采样监测的具体方法，30平米以下的空间一般放三个平板，成对角线放置，如果大于30平米的按照平方分东南西北中五个方位放置，距离地面和墙壁都有明确的要求。

[ 本帖最后由 风平浪静 于 2007-10-20 10:28 编辑 ]

lisamt

在卫生部《消毒技术规范》（2002年版）中，有致病菌的具体检测方法,要用专用的增俊液增菌后转血平板，再根据形态等特性做判断。

也有医院取0.2ml 采样液涂布血平板，不知可否？呵呵，我们医院没有做，因为我刚接手这部分，如果按标准做，人手有些紧张。另外，你们医院做监测，微生物室怎样收费呀？我们是30元，实际到帐15元，如果按标准我们是赔本呀

lisamt

2.1.11.2.2大肠菌群检测方法
(1) 操作步骤
取样液5ml接种50 ml乳糖胆盐发酵管，置35℃±2℃培养24 h，若不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。
如产酸产气，则划线接种伊红亚甲蓝琼脂平板，置35℃±2℃培养18h～24h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。取疑似菌落1～2个作革兰染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35℃±2℃培养24 h，观察产气情况。
(2) 结果报告
乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红亚甲蓝平板上有典型大肠菌落，革兰染色为阴性无芽孢杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。
2.1.11.2.3铜绿假单胞菌检测方法
(1) 操作步骤
取样液5 ml，加入到50 ml SCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±2℃培养18h～24 h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃±2℃培养18h～24h，观察菌落特征。铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。取可疑菌落涂片作革兰染色，镜检为革兰阴性菌者应进行下列试验：
氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。
绿脓菌素试验：取2个～3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃±2℃培养24 h，加入三氯甲烷3 ml～5ml，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1ml，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。
    硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃±2℃培养24 h，培养基小倒管中有气者即为阳性。
        明胶液化试验：取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃±2℃培养24h，取出放于4℃～10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。
        42℃生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24h～48h，有铜绿假单胞菌生长为阳性。
(2) 结果报告
    被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
2.1.11.2.4金黄色葡萄球菌检测方法
(1) 操作步骤
    取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±2℃培养24 h。自上述增菌液中取1或2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35℃±2℃培养24h～48 h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，排列成葡萄状，无芽孢与荚膜。镜检符合上列情况应进行下列试验：
    甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置35℃±2℃培养24h，发酵甘露醇产酸者为阳性。
    血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，放灭菌小试管中，加入等量待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混匀，放35℃±2℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24 h 之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5 ml作为阳性与阴性对照。
(2) 结果报告
    凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。
2.1.11.2.5溶血性链球菌检测方法
(1) 操作步骤
    取样液5ml加入到50ml葡萄糖肉汤，35℃±2℃培养24 h。将培养物划线接种血琼脂平板，35℃±2℃培养24h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。挑取典型菌落作涂片革兰染色镜检，应为革兰阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验：
    链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2 ml（0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液），加入0.8 ml灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24 h肉汤培养物0.5 ml和0.25 % 氯化钙0.25 ml，混匀，放35℃±2℃水浴中，2 min观察一次（一般10 min内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继续放置24 h观察，如凝块全部溶化为阳性，24 h仍不溶化为阴性。
    杆菌肽敏感试验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35℃±2℃下放置18h～24h，有抑菌带者为阳性。
(2) 结果报告
    镜检革兰阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌。

苏州

谢谢！按照您医院所有的环境微生物检测都用血平板，具体放置几块应根据采样的面积计算，看到有疑似金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌的菌落，做个简单的鉴定。   
那么，卫生部《消毒技术规范》（2002年版）中（P 202页）
3.17.8 空气消毒效果监测
3.17.8.1 采样时间：在消毒处理后、操作前进行采样
3.17.8.2 采样方法：平板暴露法
（1）布点方法：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁1M处；室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1M处。
（2）采样方法：将普通营养琼脂平板（直径9cm）放在室内各采样点处，采样高度为距地面1.5M 采样时将平板打开，扣放于平板旁，暴露5min，盖好立即送检。
3.17.8.3  检测方法：按照2.1.3要求进行。
     平板暴露法结果计算公式：
     细菌在总数（cfu/m3）=50000N/（A×T）
     式中A为平板面积（cm2）；T为暴露时间（min）；N为平均菌落数（cfu）。
3.17.8.4 结果判定
Ⅰ类区域：细菌总数≤10cfu/m3（或0.2 cfu/平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格
Ⅱ类区域：细菌总数≤200cfu/m3（或0.4 cfu/平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格
Ⅲ 类区域：细菌总数≤500cfu/m3（或10 cfu/平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格格
3.17.8.5 注意事项
采样前、后关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min进行采样。
      以上卫生部《消毒技术规范》（2002年版）中（P 202页）所指的普通营养琼脂平板是否不要做了？您医院所有的环境微生物检测都用血平板，是否有规范和国家标准？

莲雾

原帖由 lisamt 于 2007-10-20 21:13 发表

                               
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2.1.11.2.2大肠菌群检测方法
(1) 操作步骤
取样液5ml接种50 ml乳糖胆盐发酵管，置35℃±2℃培养24 h，若不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。
如产酸产气，则划线接种伊红亚甲蓝琼脂平板，置35℃±2℃培养 ...

对于空气采样我不太懂，5ml取样液是如何采得的？:)

潮水

我们对空气中溶血性链球菌检测时，血平皿和普通琼脂平皿是放在同一个位置的，选点按以下医院消毒卫生标准。
（1）布点方法：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁1M处；室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1M处。
（2）采样方法：将普通营养琼脂平板（直径9cm）放在室内各采样点处，采样高度为距地面1.5M 采样时将平板打开，扣放于平板旁，暴露5min，盖好立即送检。

二进制

与日常空气细菌培养原理相同,不同之处是本贴内容要求使用血平板而已.培养长菌后要鉴定,谢谢!

txzhou

我们用的血平板是在普通营养琼脂中加入5%的羊血，可以很明显看到这两种细菌的菌落特征和溶血环，对漏检有帮助。

苏州

谢谢您的提供帮助！:handshake :handshake :handshake

苏州

非常感谢提供帮助！:handshake :handshake :handshake

lisamt

不好意思 ，我 引用的是物表致病菌的监测

莲雾

没关系，谢谢你的热心，欢迎多来论坛聊聊！

琪纹

同意5楼的观点,<消毒技术规范>(02版),空气采样时采用普通营养琼脂平板,主要检测细菌计数,致病菌的检测是采样回来后取一定量采样样品经过增菌,血平板分离等步骤进行的.和采样过程无关.见<消毒技术规范>P204.