[简介]诺瓦克病毒实验室检测方法

叹息之墙

p>诺瓦克样病毒（Norwalk-like Viruses,NLVs），是一种分NLVs 的直径约为26~35nm ，无包膜，呈二十面<br/>布广泛的肠道腹泻病毒，暴发无地域性，无季节性，体对称。通过负染色电镜照片显示，NLVs 是具有典<br/>能引起成人和儿童急性胃肠炎，是继轮状病毒型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。从胃<br/>（Rotavirus,RV）之后又一引发病毒性胃肠炎的最主要肠炎病人的粪便排出，在恢复时期体内抗体量达到最<br/>病原。诺瓦克样病毒与食物、水源等的污染造成的急高。不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模<br/>性胃肠炎暴发密切相关。</p><p>世界范围内每年由NLVs 引起急性腹泻的病例就超过7百万个，仅次于急性呼吸疾病，给人们的生活带来相当大的威胁，NLVs 的预防检测工作显得尤为重要，下面介绍一些NLVs 的检测方法。</p><p>1 电镜法<br/>包括直接电镜法(EM)和免疫电镜法(IEM)，EM 法观察的灵敏度较低，要求每毫升粪便样品中至少有大约106 个病毒粒子，因此只能用于患病早期病毒大量排出时采集的样本检测。IEM 法比EM 法的敏感性可提高100 倍，主要应用患者恢复期血清捕捉同型抗原，从而增加检出率。1972 年Kapikian 等利用的IEM 首先检测，但该方法不能广泛普及；检测结果与操作者的技能和经验有直接关系；灵敏度相对较低。</p><p>2 免疫法<br/>包括放射免疫法(RIA)、生物素-亲和素免疫法(Biotin-AvidinImmunoassy) 和酶联免疫法(ELISA)。RIA 法的灵敏度比IEM 法可提高10~100 倍，可以检测出抗体升高的水平，为流行病学提供更有参考价值的资料。RIA 法的不足之处在于它需要6 d，且需要放射性同位素标记。为了简化方法，美国CDC 建立了生物素-亲和素免疫法，其灵敏度与RIA 法相当，目前该<br/>方法已成为美国CDC 检测诺瓦克病毒抗原和抗体的标准实验方法。1992 年Jiang 等重组杆状病毒表达NLVs 衣壳蛋白成功后，建立起的NLVs 酶联免疫检测方法快速、灵敏、经济，其不足之处是免疫反应的株型特异性太强，所以应用范围还比较窄。</p><p>3 分子生物学检测方法<br/>自从克隆出NVLs 的cDNA 片断，并完成测序后，基于基因组的检测方法即RT-PCR 方法迅速发展了起来。RT-PCR 方法非常特异、灵敏，能检测到低到20~50 拷贝的病毒核酸，是目前最快速灵敏的检测NLVs 方法。上世纪九十年代以来，研究者们分别成功地运用RT-PCR 方法对感染者粪样及传播样品中的NLVs 进行了检测，设计引物对基因相对保守的区域进行扩增，获得了较高的阳性率，但不能判断其是否存活。近两年研究者开始应用等温核酸扩增法[7-9] (nuclieic acid sequence-based amplication,NASBA) 直接扩增RNA 检测NLVs ，样品中病原RNA 得到指数级扩增，产物通过琼脂糖凝胶电泳或斑点印迹杂交鉴定结果。该方法的灵敏度略低于RT-PCR 法；整个过程只有一步RNA 扩增，避免了RT-PCR 存在的DNA 交叉污染；缩短了操作时间；假阳性率低。笔者认为NASBA 法是一种准确、快速的核酸扩增法，在以后的有害微生物快速检测中将得到广泛应用。</p>

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谢mts老师给我们提供的资料，使我们对诺瓦克病毒的实验室检测有了一个概貌的认识！