关于吞噬和黏附的镜下区别技巧的讨论

巴斯德之徒

在微生物之家论坛上有这样的一些帖子:


1.
以下是引用巴斯德之徒在2007-9-15 16:29:31的发言：

不是,是稀释复红.为什么说"细胞吞噬确实难判定"?bjyy老师是指....?


有时分不清是落上去的还是吞噬的

                               
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2.
吞噬的细菌周围有非常薄的一圈不着色的区域,是在吞噬时被包裹到细菌细胞表面的原来白细胞的细胞膜的一部分.
而附着是没有这些结构的,另外,还有一些手段也能帮助辨别吞噬和附着,比如一条杆菌有一半在细胞上而另外的一半在细胞外,这肯定就是附着;同样的道理,如果有一条链球菌,有一部分链在胞内,而一部分在胞外,那也是附着;再有如果有些链球菌或G-杆菌/G+杆菌被发现在细胞上,但白细胞周围有大量的正常菌群或者黏附着正常菌群的鳞状上皮,那么这些所谓的吞噬很可能就只是附着.

3.
以下是引用巴斯德之徒在2007-9-15 22:43:58的发言：
如果有些链球菌或G-杆菌/G+杆菌被发现在细胞上,但白细胞周围有大量的正常菌群或者黏附着正常菌群的鳞状上皮,那么这些所谓的吞噬很可能就只是附着.


经常是这样的。理想状况（如你贴的图片）毕竟是难得，要在混乱中找到真谛就很难。

                               
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下图应如何判断？





4.

以下是引用czx在2007-9-15 23:40:06的发言：
巴老师非常好的图片，谢谢分享！ＢＪＹＹ老师图片确实难判断，多数着色较深的阳性菌都是粘附．临床上这类样本最多．

正如CZX老师所说,这些视野中的所谓"吞噬",其实多数是黏附,因为这些G+细菌都有两个不支持吞噬的特点:
1.黏附于细胞核上,真正的吞噬应该是在细胞浆中的.
2.多数细菌缺乏一圈不着色区域.
另外就是菌量太大又太集中,感觉就象是撒在上的一样.

5.

典型的吞噬或黏附容易判断，不典型的的确难以判别．尤其是那些似是而非的吞噬或黏附就更不好区别！更有的时候，见不到吞噬或黏附，仅仅就是大量的伴行菌（伴ＷＢＣ），病人又有临床感染症状，血象＼Ｘ胸片又支持肺部感染，又培养出与镜下一致的细菌，这时候，怎么办？药敏试验做还是不做？是什么原因导致看不到吞噬现象？
形态学的观察需要日积月累的实战经验！
致病菌的判断同样如此！
综合考虑最重要！
顾此失彼、一偏概全都不可取！

6.

以下是引用薇荷在2007-10-3 0:31:03的发言：
典型的吞噬或黏附容易判断，不典型的的确难以判别．尤其是那些似是而非的吞噬或黏附就更不好区别！更有的时候，见不到吞噬或黏附，仅仅就是大量的伴行菌（伴ＷＢＣ），病人又有临床感染症状，血象＼Ｘ胸片又支持肺部感染，又培养出与镜下一致的细菌，这时候，怎么办？药敏试验做还是不做？是什么原因导致看不到吞噬现象？

"见不到吞噬或黏附，仅仅就是大量的伴行菌（伴ＷＢＣ），病人又有临床感染症状"
导致该原因其实只要询问临床和认真分析不难理解的,有两点原因可以导致魏老师所说的情况:
一是抗生素治疗----经过抗生素治疗而后送检的标本,如果细菌恰好对所使用抗生素敏感,就可能导致该现象.在抗生素完全杀死细菌之前还会经过一个过度期即L型变异期,对于G+菌可以形成染色不完全,或者碎片;而G-菌则形成球形体,之后除了少数细菌能继续存活外,大多数细菌会在白细胞的各种溶酶的作用下被彻底消灭;而你说的"伴行菌"可能是由于有很多抗生素在白细胞胞内的浓度比胞外大很多倍,所以首先是胞内的细菌先被消灭,而后才是胞外的细菌.
二是白细胞(包括中性粒,单核-巨噬细胞等)的各种溶酶的溶菌作用-----由于细菌/真菌等在人体内的清除在天然状态下(无抗生素的作用)主要依靠非特异性的细胞吞噬和溶菌作用或在特异性免疫的调理和协同作用下完成该过程.对于时间较长的化脓性感染,胞内的细菌几乎已经被消灭得差不多了,如果不花大力气长时间的全片搜寻很可能看不到典型的吞噬------这点在我这儿非常常见,很多没有耐心的同志看上几分钟找不到就放弃了,结果让我复核时就找到了典型视野!
以上是常见的导致你所说的胞外有细菌而胞内无细菌的正常情况,此时胞外和胞内的细菌一样有意义,都需要进行鉴定和药敏.
还有一种非正常情况,就是经过治疗后或陈旧性脓肿的炎性产物中本来就已经没有细菌,而胞外的细菌不过是后来污染进去的(以痰液为例,污染就来自上呼吸道正常菌群或定植菌),此时你所说的"伴行菌"恐怕就不能当成"致病菌"(其实应该叫病原菌)处理了,否则只会误导临床!
而要区别是"正常情况"和"非正常情况"也是有办法的,一是标本必须要经过洗涤后才能压片染色,二是要知道真正的细菌/真菌感染是一定会出现典型的吞噬或炎性包裹现象的,只不过是病程中不同阶段的表现和经过临床治疗干预后的表现变得不典型了而已,耐心和认真的搜寻包括过度期形态在内的胞内/包裹物内的吞噬包裹现象你就一定会有所发现的.
最后要对大家说的就是两个关键词:      耐心      时间.

7.

以下是引用cjq12862在2007-10-2 12:32:43的发言：
我想请教巴斯德老师一个问题，放大之后看到的“ 被WBC吞噬的细菌” 肯定是被吞噬了么？可不可能是细菌在WBC的外面，紧贴细胞壁重叠之后固定染色如图中所看到的呢？被吞噬的细菌能被正常染色么？
期待老师的回答。

                               
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问的好!
但要作到正确区别黏附与吞噬并不是一个非常容易就办到的技术,凡是到微生物室的同志我都会花大量的精力和时间教她/他学习看片,除了需要正确区分G-/G+外,就是要掌握怎么筛选标本,怎么在低倍镜下选择具有代表性的典型视野,还有就是怎么区分吞噬和黏附.
有悟性的同志大约也至少需要半年的时间强化训练才能掌握好正确的染色技术和读片技术.而悟性不好的同志就不好说了(我这儿曾经有一位同事上了2年左右的细菌室也弄不清该怎么看片:选哪儿,怎么区分吞噬和黏附,以及细胞组成分布特征与细菌/真菌感染的相关性).
比如这个主题的图片上鳞状上皮上的G-杆菌就是一黏附,而以下连接的图片则是吞噬.具体技巧我也曾经在论坛上反复提到过的.

相关链接:

http://www.microbiohome.com/forum/dispbbs.asp?boardID=4&ID=7430&page=1
http://www.microbiohome.com/forum/dispbbs.asp?boardID=4&ID=7552&star=3&page=1



从事微生物检验的同行朋友是否在工作中也有这样的疑惑,那就发表一下自己的看法吧!

[ 本帖最后由 巴斯德之徒 于 2007-10-4 21:22 编辑 ]

莲雾

我觉得要正确判断吞噬或黏附，还需要多与临床联系。看涂片有许多技巧，以后遇到问题还要请巴版多给些指导。

野渡无人

同意莲版观点！最好是能有几个专家在一起讨论更好了（可惜一般医院达不到）！比如骨髓检查，经常会出现意见不一致的情况，你认为这样，我认为那样的时候非常多见！主观性太强！有时需结合化学染色、流式细胞检查、染色体检查、融合基因检查！如果仅靠涂抹细胞观察，临床符合率仅为50-70%左右（专家才如此）！相信微生物涂片也是如此！最好应结合临床情况、标本采集情况、镜下所见情况、平板生长情况等等综合分析，才能有效提高临床符合率 ！当然，看片时的技巧也是至关重要的！望各位专家将经验透漏一二，也让新手们提高提高！:handshake :handshake :run :run

巴斯德之徒

再上传两张典型吞噬和黏附的图片:


该图片将焦距对准了G+球菌,大家注意,这些细菌是位于脓细胞上方的,而属于吞噬的G-杆菌由于与细胞核处于相同的平面,在G+球菌的下面,所以比较模糊.


而该图将焦距对准了G-杆菌,此时细胞核和胞浆中的G-处于相同的平面.
另外,请注意G-杆菌周围一圈着色很淡的区域,那是吞噬时留下的,原本是该细胞的细胞膜的一部分.

xyyy

非常好的帖子，以前确实没有这么仔细的去分辨。谢谢巴版。