微生物实验室关于细菌培养相关问题的说明

沧浪之水 · 发表于 2009-6-18 06:25:56

本帖最后由沧浪之水于 2009-6-18 19:57 编辑

注：这篇资料是由我院细菌室专业人员提供的，结合本院实际工作向临床医务人员告知的。我在院感三级网络会议上择要解说，同时在院内网上挂出，在院感通讯上刊登，广泛宣传，引起广大医务人员关注，共同做好微生物相关工作。欢迎各位老师批评指正！
微生物实验室关于细菌培养相关问题的说明
一、细菌培养标本采样注意事项：
1.细菌培养标本须置于无菌容器中。平时常见的问题有：
(1) 尿培养应留样于无菌试管或无菌痰杯中。（不合格标本大部分是因为留在尿常规杯中：因为有些病区采用无菌痰杯留取尿培养，与尿常规相比，同为尿液，两种杯子又相似，一些护士贴条码时可能贴反了。或者条码是贴对的，但患者留样时，把盖子换了过来盖错了。）
(2) 痰培养应留样于无菌痰杯中。（不合格标本也大部分是因为留在尿常规杯中，这两种杯比较相似，就是盖子不一样。）
(3) 胸腹水等标本应留样于无菌试管或血培养瓶等中。（不合格标本大部分是因为放在抽血的真空管中。）
2.痰培养标本不合格者，多以口水居多或口腔污染严重。故痰标本采样须注意：
(1) 采样时间以清晨为最好，此时痰量多，含菌量反映真实情况。
(2) 采样前，应清水漱口，除去大部分口腔内杂菌，然后用力从气管深部咳出痰液。
3.尿培养标本不合格者，多以污染而致三种以上杂菌生长居多。尿培养不合格者在本院众多科室中，以内分泌科老年女性糖尿病患者居多。病人留取中段尿时，须注意：
(1) 消毒：即先用温和中性肥皂水清洁会阴部，女性将阴唇用手指向两旁拔开，男性应翻上包皮；仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围。
(2) 而后再直接留取中段尿于无菌容器中
(3) 此点护士应加强对患者进行宣教。
(4) 特别需杜绝的是一些患者见无菌容器太小直接留取中段尿有难度，于是把小便拉在痰盂等大容器中，再把小便倒在无菌容器中送检。
4.大便培养标本不合格者，多以送检时间过长导致标本干燥无法培养，故大便标本须及时送检（1小时内，最好在上班时间直接送细菌室检验）。
5.脓液伤口等标本，采样时须注意无菌操作，用无菌生理盐水或70％酒精拭去表面渗出物，尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样。请尽量不要对伤口陈旧脓液进行取样，因为陈旧脓液已经没有营养，细菌在脓液里没有生长空间，陈旧脓液里的细菌可能已经老化死亡，检出率较低，即使涂片看到细菌，那是死菌的可能性非常大，因此，在做培养取材上主张取化脓感染周边的新鲜组织。
6.男性尿道拭子或前列腺液，采样时，须先用肥皂和水对尿道口及阴茎头对进行清洗，以免标本受到大量污染。
7.脑脊液标本尽量于上班时间采样，以便及时送至细菌室进行细菌培养，避免细菌自溶造成假阴性。如一定要在夜晚采样，则须对照“血培养”那样处理，从检验科取血培养瓶，把脑脊液打入血培养瓶中进行培养提高阳性率。（建议：在平时，脑脊液细菌培养也采用血培养瓶进行培养，以提高阳性率）。
二、细菌培养的条形码选择：
1.常规培养
标本检验目的选择说明
痰痰细菌培养及鉴定同时进行一般细菌培养、念珠菌培养、嗜血杆菌培养
尿液尿液细菌培养及计数及鉴定进行一般细菌培养、细菌计数
大便大便细菌培养及鉴定进行沙门菌及志贺菌培养
血液血液细菌培养及鉴定采用血培养瓶进行培养
脓液、分泌物、胆汁、腹水等无菌体液及其它标本普通细菌培养及鉴定一般细菌培养
血液细菌培养及鉴定为提高检出率，可采用血培养瓶进行细菌培养。具体操作：检验目的选择“血液细菌培养及鉴定”，而标本种类，把“血液”改成对应的具体标本（如腹水、胆汁、腹透液等）。具体电脑操作见备注。
备注：开条形码时，更改标本种类具体操作：用鼠标点击检验目录后面的标本种类，如“血液”，会跳出标本种类列表，在里面选择对应的标本种类即可。
2. 特殊培养
真菌培养、淋球菌培养、霍乱弧菌培养、支原体培养、肺炎支原体快速培养等，选择对应的“检验目的”，把默认的标本种类改成对应的“送检标本”即可。具体电脑操作见上表备注。
三、细菌培养标本送检注意事项
1.细菌培养标本采样后，请及时送检。
2.在上班时间，请直接送到医技楼三楼细菌室。
3.在非上班时间（如中午、夜晚、周六下午、周日），请送到门诊化验室，门诊化验室24小时值班，会对标本进行妥善处理。
4.脑脊液标本培养须及时接种，不得储存，否则一些病原菌会自溶，故请于上班时间及时送检。
5.如因各种原因不能及时送检的，尿标本、粪便标本请于40C冰箱保存，血培养及其它标本（脑脊液除外）请常温保存。
四、细菌培养的报告时间：
1.血培养，如有细菌生长，何时出结果，则何时发报告。一般细菌都在3天内能完成分离、鉴定及药敏，然后出报告。疑难菌或生长缓慢细菌，报告时间可能会延长。
血培养，如培养6天内还无细菌生长，则直接报告“培养六天无细菌生长”。
2. 其它标本细菌培养一般2-3天出最终报告，疑难菌或生长缓慢细菌最终报告时间可能会延长。如果患者情况较急，临床可在标本送检次日来电话询问培养情况，在标本送检的第二天，大部分培养标本是可以知道有否细菌生长（当然生长缓慢细菌除外），并可知道是哪类菌生长（革兰阳性或阴性菌或真菌），此初步结果予临床有一定参考意义。
五、细菌培养报告单的解释
1.我院对病原菌的药物敏感试验，是用细菌鉴定仪自动测最低抑菌浓度（MIC）值，再自动根据CLSI标准得出“敏感”“耐药”“中介”的判断，在化验单上，分别标注“S”“R”“I”，并打印对应的MIC值。舒谱深等少数药物，我们是用手工K-B法测抑菌圈大小，再根据CLSI标准得出“敏感”“耐药”“中介”的判断，所以在化验单上，没有打印MIC值。
2.为什么细菌药敏的抗生素不能自由选择，报告单上的抗生素，我们医院一部分没有？
答：(1) 药物敏感试验采用的商品化板条，已经对各种抗生素进行组合集成，我们无法对抗生素进行单独选择。但我们在多种组合中，尽量选择符合我们医院实际情况的抗生素组合的板条。(2) 在整套药敏试验中，已经包含了临床上常见抗生素类别。每一类抗生素里所选择的是具有标志性的抗生素，它的结果可以“预报”同类其它抗生素。(3) 我们尽量在每张报告单的评论栏里注明抗生素的“预报”情况以供参考。
3.为什么细菌培养的结果与临床感染情况不符？
答：主要有五种可能：(1) 用药后，细菌受到抑制，或假死，或死亡，或在抗生素作用下形成L型细菌，培养结果无细菌生长，造成假阴性。(2) 标本在采样时未按规范操作导致“标本不合格”，以致检出的病原菌，非患者感染的真正病原菌。(3) 采样或送检或培养时，标本受到污染，以致把污染菌当成病原菌。(4) 一些厌氧菌感染，我们做普通培养无细菌生长，但实际感染仍存在。(5) 一些生长非常缓慢的细菌（如分枝杆菌）感染，我们做普通细菌培养，在两天内尚未形成肉眼可见菌落以致漏检。
4.为什么药敏结果与临床用药的疗效不符？
答：主要有三种可能：(1) 体外药敏试验和体内药物疗效确实有差异，因为体外与体内的环境不同，有的细菌可以利用体内的一些物质生成抵抗抗生素的成分，能使抗生素失效，故存在一些体外敏感的抗生素，体内却耐药。(2) 由于采样不当或污染等等原因，使检出的病原菌不正确，故药敏结果全不对。具体说明见上。(3) 用药剂量不同：药敏实验的药敏浓度与实际剂量有较大差异。
5.为什么同一个病人的脓液等无菌体液检查，涂片检查阳性，但细菌培养阴性？
答：主要有三种可能：(1) 如使用抗生素，或采样陈旧脓液，在标本中，细菌已死亡或假死或形成L型细菌，或者被白细胞吞噬掉，这些，都会造成涂片可检出细菌，但培养阴性。(2) 厌氧菌感染，普通细菌培养无法对厌氧菌进行培养。(3) 标本送检时间过长或干燥等原因，造成细菌死亡无法培养。
6.为什么同一个病人的脓液等无菌体液检查，涂片检查阴性，但细菌培养阳性？
答：主要有两种可能：(1) 涂片检查是挑取少量标本涂于玻片上再在显微镜下检查，局限性较大，容易造成漏检。(2) 培养标本在采样时或培养时受到污染（前者，临床应注意无菌操作；后者，细菌室也在加强规范化操作以避免污染的发生）。
六．如对细菌培养及相关检验有任何疑问，欢迎与细菌室联系交流：
细菌室：××××××××

微生物实验室关于细菌培养相关问题的说明（定稿）.doc (40 KB, 下载次数: 278)

小核桃 · 发表于 2009-6-18 08:25:26

正确的留取和送检是正确结果的前提，学习了！

佳加 · 发表于 2009-6-18 09:29:15

很好的东东，学习了，谢谢！

朱德权 · 发表于 2009-6-18 14:13:29

谢谢提供资料!学习中!

柳荷 · 发表于 2009-6-18 18:25:20

正确的留取和送检是正确结果的前提，需要向临床説明。

茉莉花开 · 发表于 2009-6-18 18:46:12

经典！

梦瑶 · 发表于 2009-6-18 19:27:27

谢谢老师提供的资料!正确的采样才会出正确的结果

hxwsw · 发表于 2009-6-19 16:41:23

1# 沧浪之水

不错!工作很细致哈,谢谢分享!粗读了一下,有一条:CSF标本不建议采用血培养瓶送检,您们微生物室应知道原因的,可能是有笔误吧!

玉玲珑 · 发表于 2009-7-10 11:52:05

1# 沧浪之水

看了资料，内容很实在，感触颇多，对贵院的细菌室专业人员的敬业精神表示敬佩，如果我院的细菌室专业人员也能如此就好了！

szwuxl · 发表于 2009-7-10 12:30:17

非常实用！尤其是对于临床医务人员具有非常重要的指导作用。

沧浪之水 · 发表于 2009-7-15 23:04:25

9# hxwsw
谢谢hxwsw老师指导！但尚存疑问：
脑脊液细菌培养采用血培养瓶进行培养，可以提高阳性检出率，但对某些病原菌（如脑膜炎奈瑟氏菌等）会容易自溶，易产生假阴性（可谓有利有弊）；脑脊液细菌培养若采用无菌试管进行培养，阳性检出率相对较低。
上面这种说法正确吗？请各位老师答疑，先说谢谢了！

bozhouchengying · 发表于 2009-7-17 15:34:00

非常不错的东东，谢谢分享！

hxwsw · 发表于 2009-7-20 23:40:21

9# hxwsw
谢谢hxwsw老师指导！但尚存疑问：
脑脊液细菌培养采用血培养瓶进行培养，可以提高阳性检出率，但对某些病原菌（如脑膜炎奈瑟氏菌等）会容易自溶，易产生假阴性（可谓有利有弊）；脑脊液细菌培养若采用无 ...
沧浪之水发表于 2009-7-15 23:04

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我们的CSF是不注入血培养瓶的，主要考虑的是：
1.商用血培养瓶中一般均含有SPS，对脑双有毒性，而脑双正是CSF中最重要的病原菌。
2.临床抽取的CSF一般送量不大，注入具有过多增菌液的血培养瓶后，比例不对，是否能起到增菌而达到快速检测的目的值得探讨。并且送检的CSF一般均需做多项检测，标本量极其有限。
3.CSF标本送达实验室后要特别注意离心后的直接涂片结果，对细菌（肺链，流感）、真菌（含隐球菌）和TB都有非常重要的诊断作用，对于其它一些环境中常见的细菌，如表葡，不动杆菌等，增菌的结果如果没有直涂结果的支持，污染的可能性很大，这时的增菌又有什么意义呢？曾有一位美国老太在我室工作三天，有一天她在镜下观察一CSF直涂革兰染色标本时全片发现一根不典型似革兰阳性杆菌，她坚持要将原片脱色后重新做抗酸染色，染色后又仔细观察了20分种（尽管没有新的发现），说明其对直接涂片的高度重视。实际上直接涂片的发现一般都能在培养中得到证实。所以，CSF标本的检验首先要保证直接涂片所用，其次在血平板和巧克力平板上可采用大量接种方式（如倾注法或定量加液器法），增菌可采用BHI肉汤而不是含SPS的血培养瓶。