找寻尿培养划线方式的正确解释

明玥

看胡继红老师讲课过程中，有个问题不太懂，关于尿菌落计数的方法为尿培养的划线方式，见图所示。没有看懂，请有识之士给予正确解释和解读。

二进制

明玥 发表于 2017-1-23 22:26
老师讲解的非常专业，呵呵，可能我没有说清楚，是指图片上的左右两个皿中的划线有何不同？

面向显示屏。左边划线法，称之为分区划线，区与区之间所用接种环，必须过火焰灭菌。主要用于细菌种类繁多必须把目标菌分离出来之分（离）纯（化）标本。右边划线法，主要用于准确性统计接种于平板琼脂表面标本内细菌总数量，使菌体一个、一个、…独立分开，不重叠、或成堆，孵育长成菌落亦如是，观察时，好一个、一个…统计不遗留而精确。沾取标本接种全程不用过火焰，把接种环上菌体悉数分摊于平板琼脂表面，最后以过火焰灭菌结束。

二进制

面向显示屏，右边者为好。一次性定量接种环（５微升）取一环划直径，再沿直径向两边密划线（不烧环灭菌），目的：尽量让标本内菌体一个、一个散开，好长成一个、一个独立菌落便于计数，皆因标本接种容量已知，标本内菌体（落）数未晓，待孵育后数数才得知。用“固定式、可调式定量加样枪”定量加样亦行，只不过所用笔头必须无菌。加样后，用灭菌放冷接种环重复上述方法划线接种而已

明玥

二进制 发表于 2017-1-23 05:19
面向显示屏，右边者为好。一次性定量接种环（５微升）取一环划直径，再沿直径向两边密划线（不烧环灭菌）， ...

左右平皿划线方式不同，有什么区别和解释或意义？

jerkran

学习了

二进制

左右平皿划线方式不同，有什么区别和解释或意义？
面向显示屏，以右边划线方式最标准，让标本内菌体一个、一个散开，好长成一个、一个独立菌落。接种平板孵育过夜后，在明亮光线下，一个、一个、一个…数出该平板上肉眼所见到菌落总数。菌落总数×２００＝该份尿标本cfu／ml。1毫升等于１０００微升，为５微升２００倍。谢谢！

明玥

二进制 发表于 2017-1-23 20:32
左右平皿划线方式不同，有什么区别和解释或意义？
面向显示屏，以右边划线方式最标准，让标本内菌体一个、 ...

老师讲解的非常专业，呵呵，可能我没有说清楚，是指图片上的左右两个皿中的划线有何不同？

明玥

二进制 发表于 2017-1-24 04:51
面向显示屏。左边划线法，称之为分区划线，区与区之间所用接种环，必须过火焰灭菌。主要用于细菌种类繁 ...

谢谢您详细的解答。二种不同的划线法结果意义是否相同？不同分区的标准为什么不一样呢？

二进制

二种不同的划线法结果意义是否相同？
当然不同。
不同分区的标准为什么不一样呢？
理应一样。一般情况下，分区划线都分为四区。但，视原始标本涂片、染色、镜下，粗略估算所见菌体总数多寡而定，多者分四区，寡者，分三区，甚则二区。分区划线以分出独立菌落多寡论优劣
谢谢！

二进制

面向显示屏，左边划法，在多如繁星般菌体中，寻找目标细菌；右边划法，为计数标本内菌体总量。菌落是单个菌体经培养、孵育、生长、繁殖而成的菌体集团。谢谢！

ohj妮

很专业的问题，学习了，也看到过微生物室这样做，就是没问为什么

明玥

二进制 发表于 2017-1-24 10:47
面向显示屏，左边划法，在多如繁星般菌体中，寻找目标细菌；右边划法，为计数标本内菌体总量。菌落是单个菌 ...

为什么第一区50000cfu/mll，第二区75000cfu-ml,第三区100000cfu/ml?

二进制

明玥 发表于 2017-1-24 22:00
为什么第一区50000cfu/mll，第二区75000cfu-ml,第三区100000cfu/ml?

若然事先都知晓了，还尿培养划线进行尿菌落计数干什么？简直多此一举。也许听课过程，没连贯出现断层，只听了头和尾两部分、失中间。语言直白，敬请谅解。另外，此次“胡继红老师讲课”，井底蛙般二进制并没在现埸参与，明玥实习版主老师之疑，唯胡继红老师本人、或有份参与全程之其他老师才能完整解答，井底蛙般二进制就此静候完美之答。谢谢！

明玥

二进制 发表于 2017-1-25 05:11
若然事先都知晓了，还尿培养划线进行尿菌落计数干什么？简直多此一举。也许听课过程，没连贯出现断层， ...

老师的专业知识非常令人钦佩，希望老师能够多多给大家指导这方面知识

二进制

常言云：十只手指，各有长短；寸，有其所长；尺，亦有其所短。三人行，有我师；能者，为师等等诸如此类。“老师”称谓，似井底般二进制实属不敢当。上专业论坛，只为增长知识、不落伍而已。谢谢！

luyunzhaoabc

做微生物的可能清楚些，需要计算的，要深入研究一下。

经典红塔山

尿培养大家还在计数菌落个数吗？这种方式有很多弊端啊，受标本采集、抗生素使用、划线方式及送检时间等影响因素很大啊。

二进制

经典红塔山 发表于 2017-2-1 22:23
尿培养大家还在计数菌落个数吗？这种方式有很多弊端啊，受标本采集、抗生素使用、划线方式及送检时间等影响 ...

也许最好还是视白细胞吞噬现象。

明玥

经典红塔山 发表于 2017-2-1 22:23
尿培养大家还在计数菌落个数吗？这种方式有很多弊端啊，受标本采集、抗生素使用、划线方式及送检时间等影响 ...

能够详细对这种方法进行解释一下利弊吗？

经典红塔山

明玥 发表于 2017-2-2 07:37
能够详细对这种方法进行解释一下利弊吗？

1.标本采集是否清洁外阴，如果没有清洁外阴，混有皮肤或阴道分泌物正常菌群，菌种不单一且大多营养要求不高，繁殖迅速。
2.抗生素使用：敏感性抗生素可能会是致病菌形成L型变或在接种因为抗生素残留导致细菌菌落计数不达标。但是，你能说这个是阴性结果尿液标本吗？
3.划线方式：是否分区，搭线的方式及多少，以及原始标本起始菌量的多少，都可能导致几个区分区数目不准，可操作性及重复性操作都不好，不同的人可有不同的结果。
4.送检时间：更不要说了，非苛养细菌2个小时就可以繁殖一代。

所以，个人认为，尿液菌落计数有很多弊端。国外相关操作之所以这么做是因为能够保证取中段尿，2个小时内送检且及时处理，才可以采用这种方式，但是在中国的国情却很难把控这一点。
更合理的方式建议：
1.尿液3000rpm×5分钟，后取沉渣镜检，白细胞≥5个/HP，考虑存在尿路感染。
2.用摸片或压片的方式制片，进行革兰染色染色，寻找胞内吞噬、包裹或分布相关性好的细菌考虑为感染致病菌。
3.尿液里面的酵母样真菌胞子引起的感染极少，更多是从引流袋采集或延迟送检所致。
4.同样的观点，重复性强，不同操作人员基本都是相同的结果。