如何判断标本分离到的铜绿假单胞菌（PA）是定植菌还是感染菌？

静雨轩

   由于PA在呼吸道的定植极为常见，目前临床上对PA所致下呼吸道感染的最大困惑是诊断问题，即痰或者经气管吸引标本分离到的PA应该如何区别是定植菌还是感染菌？区别定植与感染对于抗菌药物的合理使用非常重要，否则极易导致治疗不足或治疗过度，但这恰恰是呼吸道感染临床迄今仍难以解决的问题。
(一)PA感染的危险因素
PA下呼吸道感染患者多有危险因素，常见的包括：
（1）皮肤黏膜屏障发生破坏，如气管插管、机械通气、严重烧伤、留置中心静脉导管或胃管；
（2）免疫功能低下，如中性粒细胞缺乏、实体肿瘤放化疗、糖皮质激素治疗及获得性免疫缺陷综合征(AIDS)；
（3）慢性结构性肺病，如支气管扩张症、慢阻肺、肺囊性纤维化；
（4）长期住院，尤其是长期住ICU；（5）曾经长期使用第三代头孢菌素、碳青霉烯类或者含酶抑制剂青霉素等抗菌药物，致菌群失调。当患者存在这些危险因素时，如再与已感染PA的患者处于同一病房，或工作人员疏于环境和手部清洁，或不合理使用抗菌药物等，则发生PA，甚至MDR-PA下呼吸道感染的机会更多。
在呼吸系统疾病中，慢阻肺是最常见的容易发生PA感染的基础疾病之一，尤其是进展期以及因病情加重需要住ICU和机械通气的患者s当慢阻肺急性加重患者出现以下4项中的2项时应考虑PA感染的可能：
（1）近期住院史；（2）有经常（>4个疗程/年）或近期（近3个月内）抗菌药物应用史；（3）病情严重（FEV1<30%)；(4)应用口服糖皮质激素（近2周服用泼尼松龙>10mg/d)。
(二.)PA感染的临床表现
PA为条件致病菌，常在患者体内或者医院环境中寄植，感染多继发于免疫功能低下的患者。因此，当这些患者出现发热、咳嗽、咳黄色或黄绿色脓性痰、痰液黏稠且伴有气急等呼吸道症状时，应考虑PA感染的可能；尤其是原有肺部慢性疾病的患者，平时常伴慢性咳嗽、咳痰，当出现黄绿色脓痰、呼吸困难加重及肺功能进行性减退时，应考虑PA感染的可能。
HAP患者，尤其是VAP患者PA是最常见的致病菌之一，这与气管插管或者切开建立人工气道后PA能够直接侵人下呼吸道，引起吸人性感染有关。PA下呼吸道感染的影像学无特异性，可表现为弥漫性支气管肺炎，伴有小结节和小的透亮区“微脓肿”(其病理改变基础类似体表感染，为特征性坏疽性深脓疱，周围有红斑环绕）。
PA菌血症多继发于大面积烧伤、静脉导管、心瓣膜置换术及各种严重慢性疾病等的过程中，病死率高，可有高热，常伴休克、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或弥散性血管内凝血（DIC)等。在严重全身感染时炎症标志物，如内毒素和降钙素原（PCT)可以出现升高。PA下呼吸道感染可以分为I种类型：
（1）慢性气道疾病合并PA感染；（2）吸人性肺炎（社区获得性或医院获得性）；（3）血源性PA肺炎。值得注意的是，在临床怀疑PA下呼吸道感染引起的体温升高时，需排除其他感染如鼻窦炎、尿路感染或导管相关感染等导致的发热。
(三)如何区别定植与感染
PA-HAP很少血培养阳性，所以难以通过血培养确定病原学诊断，判断感染与否的证据主要来自呼吸道标本，而PA在结构性肺病变患者呼吸道存在较高的定植率，因此，临床上面临的一个难题是如何区别培养阳性的PA是定植还是感染。
从气管插管后气道内分泌物中能够在很长时间内持续培养出PA，但可以没有症状、体征和相应的肺部影像学表现，即使是脓性痰或者气管内分泌物PA培养阳性亦不能诊断VAP。文献报道，4%~15%的慢阻肺患者痰中能够分离到PA。
广谱抗菌药物的使用能增加ICU患者气道中PA的定植，这是由于PA能增加黏液的分泌，破坏纤毛的活力，引起上皮结构受损，影响肺的清除能力。但与血培养中分离的PA相比，气道寄植的PA虽然毒力较弱，但耐药性更强，更易产生生物被膜。即使经过有效地抗菌药物治疗，PA仍可从VAP发生后8d的下呼吸道分离到。
因此，呼吸道分泌物，包括痰、咽拭子、气管吸引标本、保护性毛刷采集的标本及BALF等PA培养阳性，必须慎重评估其临床意义。
就目前的认知水平，可从以下几个方面着手解决PA定植与感染的鉴别诊断问题。
首先，临床医师采集呼吸道标本时，应严格掌握痰标本的正确留取方法，如对患者进行充分培训，留取深部咳出的痰液，并尽量避免上呼吸道分泌物的污染；气管吸引标本、保护性毛刷标本和BALF标本要比痰标本更可靠、更有价值，应尽可能采用，以提高呼吸道分泌物标本的质量。
临床微生物实验室要严格把握痰标本的质量，痰标本接种前应进行革兰染色镜检，判断痰标本是否合格，同时注意有无白细胞吞噬或伴行现象及细菌的染色和形态。痰培养应尽量采用定量培养，至少应做半定量培养。呼吸道标本的半定量、定量细菌培养能够为临床提供有帮助的参考价值。
细菌定量培养结果气管内吸引物(PA ≥ 105CFU/ml)、BALF（PA≥104CFU/ml)、防污染保护性气管镜毛刷采集的标本（PA≥104CFU/ml）达到上述阈值时，有更大的参考意义。
当呼吸道标本PA培养阳性时，应结合临床情况进行仔细分析。首先患者是否存在肺部感染的临床与实验室表现，是否有PA感染的危险因素，如果患者一般情况良好，又没有危险因素，PA培养阳性多考虑为污染或定植，可以观察，暂不做抗感染处理，更多地采取感染控制措施。
但如果患者存在高危因素或已有下呼吸道感染的临床表现，应高度警惕PA感染的可能，再充分参考其他临床指标如痰涂片镜检和定量、半定量培养结果，C反应蛋白和降钙素原等综合判断。
患者在出现下呼吸道感染时第一次呼吸道标本PA培养阳性的临床意义较大，应结合临床危险因素进行分析是否为感染致病菌；而在初始治疗采用不针对非发酵菌的抗菌药物治疗过程中，治疗有效又反复培养出PA，则应考虑为抗菌药物筛选的结果。
临床另一困难之处是在那些具有PA感染危险因素的患者，呼吸道分泌物PA与其他病原体同时培养阳性时责任菌的判断，需要谨慎确定。.
未经治疗患者如果与常见对抗菌药物敏感的致病菌如肺炎克雷伯菌、肠杆菌属细菌等同时培养阳性，则PA为定植菌的可能性大；如果与MDR菌如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)、鲍曼不动杆菌等同时培养阳性，前者又占优势，则需要分析各自定量和半定量培养结果，如果PA为低浓度培养阳性则定植菌的可能性大。
总之，与其他非发酵菌相同，在痰标本中分离出PA的临床意义即使想尽办法仍很难正确评价。本共识建议临床与微生物专家互通信息，共同协作解决这一问题，但最终判定责任归于临床而非微生物科。
有无感染的临床表现最为重要，即使是合格痰标本分离到多量单-PA，但临床并不存在任何下呼吸道感染的表现，也无需针对PA治疗。如果同时分离到其他细菌，又有下呼吸道感染的临床表现，则需要区别何种是真正的致病原或为混合感染。
当针对单一PA治疗后疗效满意时较易确定是PA感染，但当疗效不满意时也难以完全否定，因为尚有剂量、疗程、联合用药与否、是否有混合感染（特别是厌氧菌）等许多问题的干扰，也可能在治疗过程中产生急性耐药（以单药治疗最为常见）。
因此，在呼吸道标本分离到PA的患者是否需要抗菌药物治疗应当参考以下几点：
（1）有与下呼吸道感染相符合的临床症状、体征和影像学上出现新的、或持续的、或加重的肺部渗出、浸润、实变；
（2）宿主因素，如基础疾病、免疫状态、先期抗菌药物治疗、其他与发病相关的危险因素如机械通气与否及时间等；
（3）正在接受非抗PA抗菌药物治疗的患者如果病情一度好转，复又加重，在时间上与PA的出现相符合，并排除其他因素引起的病情加重；
（4）从标本采集方法、标本质量、细菌浓度（定量或半定量培养）、涂片所见等，综合评价阳性培养结果的临床意义，如痰培养多次提示PA优势生长则具有较大的临床意义。
一旦决定针对PA进行治疗后，应在72h内评价疗效，判定是否继续原治疗方案。

旭日云海

谢谢分享，对于细菌定植还是感染还是污染确实不容易界定。

猫老大

谢谢楼主分享，临床上有些患者虽检出条件致病菌，但是没有任何临床症状