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本帖最后由 小小牧童 于 2015-12-29 17:55 编辑
生物监测,哪些时候需要做阳性对照或阴性对照? 何珉 这是旧话新提了。基层医院的消毒供应中心或者检验科,对于灭菌生物监测做对照的意义和处理方法一直总有疑问,今天我们就专门聊一聊阳性对照和阴性对照的话题。 一)行业规范怎么说 一般说来压力蒸汽灭菌以后做生物监测,需要既做阳性对照也做阴性对照。消毒供应中心的行业标准WS 310-3.2009里面的附录A“压力蒸汽灭菌的生物监测方法”相关条款是这样规定的: A1 ……标准生物监测包置于灭菌器排气口的上方或生产厂商建议的灭菌器内最难灭菌的部位,并设阳性对照和阴性对照。如果一天内进行多次生物监测,且生物指示剂为同一批号,则只设一次阳性对照即可。 A3 结果判定:阳性对照组培养阳性,阴性对照组培养阴性,试验组培养阴性,判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性,阴性对照组培养阴性,试验组培养阳性,则灭菌不合格;同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。
二)阳性对照可以发现这个问题 何谓阳性对照?阳性对照是用一种效果明确的手段来检测结果的有效性。简单来讲对于生物监测,培养一支没有经过灭菌的生物知识剂就是阳性对照。说“效果明确”,是因为这支阳性对照管经过培养一定会显示出阳性的结果。如果阳性对照管都没有培养出阳性,说明要么是这一批次的生物指示剂,要么是培养阅读器出了问题,两者必居其一。在种情况下,即使试验管培养出来是阴性的结果也不能算数。有一个生动的例子,是我听一位消毒供应前辈专家讲的。好多年前去中部某省检察供应室,当地老师很自豪地告诉专家说她们供应室生物监测从来没有出现过阳性,次次都合格。然而专家一看该供应室当时常规用甲醛熏蒸消毒,而待用的生物指示剂都放在供应室里头呐,因而这些指示剂的细菌在进入压力蒸汽灭菌锅之前早已被甲醛杀死,怪不得从没显示阳性。再一查,这个供应室生物监测从不设阳性对照,因而专家检查前就都没有发现这个问题了。回想之前的灭菌结果,真的使人后怕!
三)自含式生物指示物可免除阴性对照 何谓阴性对照?与阳性对照一样,也是用一种效果明确的手段来检测结果的有效性。只不过这里说的“效果明确”指的是阴性对照组培养的结果必须是阴性。这是因为传统的生物监测用的是菌片,需要在超净台里面做接菌、转染、涂布等一系列无菌操作。在这个过程中菌片都有可能被污染。为了排除试验组做出来的阳性结果不是因为压力蒸汽灭菌没有杀死预先涂布的嗜热脂肪杆菌芽孢,而是操作员手上、超净台面上的细菌,比如常见的大肠杆菌或者金黄色葡萄球菌,将无嗜热脂肪杆菌芽孢的“菌片”平行地做一次培养,以保证操作本身的无菌性。因此当生物指示物从“菌片式”升级到“自含式”,不需要无菌操作时,阴性对照就可以省略了。不过在东北某省也碰到过通过给自含式生物指示物做阴性对照发现问题的例子。我们知道现在的生物培养阅读器用的是“空气浴”来加热,而那次当地医院图省事用水浴锅加热。水浴锅很容易滋生细菌,污染了试验管。后来就是通过阴性对照的方法发现了这个问题,再通过对细菌的鉴定,果然排除了嗜热脂肪杆菌芽孢。 综上所述,设定阳性对照和阴性对照是常用的排除干扰的实验设计方法。具体到生物监测阳性对照一定要做,自含式生物指示物一般可以省去阴性对照,但也要留意可能带来的误判。 |