正确的透析液和透析用水细菌培养技术：

莲雾 · 发表于 2010-11-23 13:28

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2010版指南要求每月一次透析液、透析用水微生物监测，但是没有写具体采多少水样和用什么培养方法？请教一下，大家平时都是怎样采样的?

黑旋风 · 发表于 2010-11-23 13:50

一般用无菌试管（经过高压灭菌过的）采集5毫升左右，采用平板倾注法！

zhoukouyy · 发表于 2010-11-23 14:42

我们用无菌注射器采样，但采样不够5MI。

随风飘尘 · 发表于 2010-11-23 14:51

用无菌注射器采样5ML放入无菌试管，取出1ML倒入无菌培养皿倾注培养。

枫叶 · 发表于 2010-11-23 15:21

我院做法同四楼。，，，，，，，，，，，，，，

莲雾 · 发表于 2010-11-25 13:59

回复 2# gexueshun1

5ml都加在平板里倾注吗？

黑旋风 · 发表于 2010-11-25 16:22

回复 6# 莲雾

取出0.5-1ML倒入无菌培养皿倾注培养

米克 · 发表于 2010-11-25 19:50

检测材料：已消毒灭菌的反反渗水收集瓶子、胰化蛋白腖葡萄糖培养基 TGEA
反渗水细菌检测和采样方法
1. 打开反渗系统，关上球阀，把连接透析机的管道拆下。
2. 打开球阀，用反渗水冲洗球阀内部30秒。
3. 用百分之70的酒精将反渗水管球阀消毒，最好连续消毒两次。
4. 等酒精已完全挥发，用已灭菌的瓶子收集约100ml反渗水，注意瓶子入口不能碰到接头外侧。
5. 把反渗水样尽快送到实验室(2小时之内)。把0.2ml的反渗水样品平均涂抹在培养基表面 (样品涂抹步骤最好在无菌平流箱内进行)。
6. 最后把培养皿的盖子合上，用透明胶带把培养皿沿边贴上封住，把培养皿反过来(盖子朝下)平放，最好能用透明胶袋把培养皿封上，以保持湿润。放置在室温环境17-25摄氏度(尽可能避光)，一星期后检查结果。
检查结果解读：
细菌菌落(CFU)点数乘5 ( 0.2ml x 5 = 1ml)
1. 根据美国AAMI标准，反渗水中细菌含量应须小于200CFU/ml。
2. 根据欧洲药典标准，反渗水中细菌含量应须小于100CFU/ml。
采样后如不能在2小时检验，可于冰箱里不超过24小时
TSA (trypticase soy agar 胰蛋白酶大豆琼脂)可适用于检验反渗水和透析液
传统血液培养基(blood agar)和巧克力(chocolate)培养基太浓会杀死受测细菌（贫养菌）
ISO建议使用TGEA (Tryptone Glucose Extract Agar 胰化蛋白腖葡萄糖培养基 ) ，培养皿培养温度17-23 摄氏度,168h, (7天）(ISO 13959：2009 )或欧洲 Edtna_Erca最佳实践指南建议使用Reasoner’s 2A 培养基，培养皿培养温度 20-22摄氏度, 120 h（5天）。

莲雾 · 发表于 2010-11-26 21:14

回复 8# 米克
谢谢米老师，为什么有的guideline提到滤膜过滤法，它与平板涂布法检测透析液的区别在哪里？还有提到action level 细菌小于 50CFU/ml是指什么？谢谢指点！

米克 · 发表于 2010-11-27 00:32

本帖最后由米克于 2010-11-27 18:57 编辑

“为什么有的guideline提到滤膜过滤法”我没看过这个指南，还没研究过过滤法与平板涂布法检测的差异问题。但是我觉得滤膜过滤法是把细菌浓缩了培养出来的数值应该做除法，平板涂布法培养出来的结果是做乘法，不知理解的对不对。
AAMI规定的采取干预措施的限制是50CFU/ml。即细菌检测结果大于50CFU/ml时就要采取措施进行消毒查找原因。

莲雾 · 发表于 2010-11-28 14:45

回复 10# 米克

谢谢您的答复！

有缘 · 发表于 2010-11-29 10:41

回复 8# 米克

我院反渗透系统和透析机的管路是接死的，没办法拆开，不知如何采样？

米克 · 发表于 2010-11-29 11:04

回复米克

我院反渗透系统和透析机的管路是接死的，没办法拆开，不知如何采样？
有缘发表于 2010-11-29 10:41

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1. 打开反渗系统，关上球阀，把连接透析机的管道拆下。
怎么会拆不下来呢？一把改锥就可以了。

无言的风琴 · 发表于 2010-11-29 15:11

透析液、透析用水的采样量没有要求，只要够培养接种即可；接种培养时有2种方法：取0.2ml均匀涂抹于平板，或取0.5ml倾注培养，此定量培养方法同其它环境卫生学监测培养。话说滤膜过滤法，那是特殊情况下培养时采用的方法，可将所有采样液（量可大些）注入滤膜，将滤过面贴粘在培养基后再培养，此法可以加大检出率（培养时是全部量并可以自己定，而常规培养取量0.2ml或0.5ml），另外在有些不知中和剂的情况下可用此法，当然注入后要用无菌水冲洗。

老土 · 发表于 2010-11-29 21:15

我院反渗透系统和透析机的管路是接死的，没办法拆开，不知如何采样？

米克 · 发表于 2010-11-30 08:51

我院反渗透系统和透析机的管路是接死的，没办法拆开，不知如何采样？
老土发表于 2010-11-29 21:15

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你们医院的透析机和供水管路是在国外连接好了以后空运过来的？要么就是你们的管路和机器是焊接上的？

忆无尘 · 发表于 2010-11-30 09:07

米克老师此话言重了吧?透析室的工作人员不是个个都能做水电工管路工的活,,就算是简单的拆卸有时也只能望而兴叹.

米克 · 发表于 2010-11-30 20:13

米克老师此话言重了吧?透析室的工作人员不是个个都能做水电工管路工的活,,就算是简单的拆卸有时也只能望而兴 ...
忆无尘发表于 2010-11-30 09:07

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没见过你这么笨的人

听韵 · 发表于 2010-12-1 10:45

从现在起,透析室工作人员要全方位发展,以适应应对从上而下的各级领导,各位老师的检查督导.

尘埃69 · 发表于 2010-12-15 14:05

我院反渗水是科室人员自己采样

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