无菌检验用洗脱液如何配制？是不是规范写错了

xiaozhouzzz

　医疗机构消毒技术规范（2012）
   　“　B．2 无菌检验用洗脱液
　　　吐温―80 1g
　　　蛋白胨 10g
　　　氯化钠 8.5g
　　　蒸馏水 1000mL
　　　将各成分加入到1000mL0.03mol/L PBS液中，加热溶解后调pH至7.2～7.4，与121℃压力蒸汽灭菌20min备用。”
          请版主以及专家老师们看一下我用红色部分标注的地方，感觉二者矛盾啊，配制时是将吐温80、蛋白胨、氯化钠加到蒸馏水中还是0.03mol/L PBS中？求解啊

xiaozhouzzz

难道是将吐温80、蛋白胨、氯化钠以及1000ml的蒸馏水一起加到1000mL的0.03mol/L PBS液中么？

胡杨

1000mL0.03mol/L PBS液: 意思是浓度为0.03mol/L P的磷酸缓冲液1000mL。

        你的疑惑不错。按上述字面理解，确实是就成了2000ML了。其实不是的。PBS缓冲液本身就是作为溶剂，起溶解、稳定、保护作用。浓度越高，对酸碱度和盐度的缓冲范围越大。蒸馏水 1000mL是不确切的。
        本配方 ，吐温―80 是起到稳定和增加蛋白溶解度作用的表活剂；蛋白胨给采样液中的微生物提供维持生存的营养和有机环境； 氯化钠 提供细菌细胞生存必须的渗透压。1000ML是溶媒。 假设如果1000mL是蒸馏水，0.03mol/L PBS液就无从谈起了。如果从0.9%氯化钠提供正常细胞的生理渗透压来看，也能够佐证是1000ML，不是2000ML。
　      所以，为了不影响使用，1000ML蒸馏水不要加。今后法规修改，可以改成下面写法，就不会有歧义了：
洗脱液配方：      
                 吐温―80            1g
　　　      蛋白胨              10g
　　　      氯化钠             8.5g
　　　0.03mol/L PBS液 1000mL
　　　各成分顺序加入到1000mL0.03mol/L PBS液中，---。

xiaozhouzzz

胡杨 发表于 2014-2-28 16:50
1000mL0.03mol/L PBS液: 意思是浓度为0.03mol/L P的磷酸缓冲液1000mL。

        你的疑惑不错。按上述字 ...

胡杨版主的解释我明白了，谢谢您这么认真细致的解读啊！！如果真的是新的规范错了，希望能及时更正，免得更多的同行一错再错啊！看来这个论坛真的很不错！有问题一起沟通交流，有知识大家共同进步！！最后向无私奉献的老师们、前辈们致敬！

冬天的白玫瑰

胡杨 发表于 2014-2-28 16:50
1000mL0.03mol/L PBS液: 意思是浓度为0.03mol/L P的磷酸缓冲液1000mL。

        你的疑惑不错。按上述字 ...

你好，无菌检验用洗脱液中加大豆卵磷脂有什么作用，我们老师要求配置含2g/L的卵磷脂，且溶液要澄清，，，，，

胡杨

冬天的白玫瑰 发表于 2014-11-3 16:19
你好，无菌检验用洗脱液中加大豆卵磷脂有什么作用，我们老师要求配置含2g/L的卵磷脂，且溶液要澄清，，， ...

        洗脱液中加卵磷脂可以中和样本残留消毒剂。溶液澄清表示完全溶解无不溶微粒。
     卵磷脂和吐温80都可以助溶，但都可以起到中和消毒剂的作用,这样就不会抑制微生物的生长,这是消除消毒剂干扰的重要手段。卵磷脂能中和季铵盐,吐温80可中和酚、醛，两者结合可中和乙醇。