血透液热原检测方法

海内知己

关于血透液的热原检测,目前大多采用鲎试剂法.但有不少检测的实验设计不够科学,有的仅单纯做检品管理,甚至连阳性管和阴性管都没有,更不用说检品阳性管.这样的检测结果是不科学、不可靠的。该实验应该还应该包括检品阳性管，它的作用的为了排除样品液对凝聚反应的影响,阴性管是为了验证操作及用具是否符合标准,阳性管是为了验证试剂的有效性.现将试验表格上传,供大家参考!:ok :ok

[ 本帖最后由 fjzzzyyygk 于 2009-1-7 11:34 编辑 ]

细菌内毒素检测报告单1.doc (38.5 KB, 下载次数: 477)

2009-1-7 11:32 上传

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lisa天使

我们医院好像无法做内毒素监测，我也想知道如何做，如果涉及的试剂和其他设备不是很贵，争取检验科也能开展。

safihu

原帖由 fjzzzyyygk 于 2009-1-7 11:27 发表

                               
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关于血透液的热原检测,目前大多采用鲎试剂法.但有不少检测的实验设计不够科学,有的仅单纯做检品管理,甚至连阳性管和阴性管都没有,更不用说检品阳性管.这样的检测结果是不科学、不可靠的。该实验应该还应该包括检 ...

有没有操作的规程，还是不太了解如果来做检测的。:(

lwk6088

请教透析液内毒素检测方法，谢谢了！！！

flyjet

鲎试剂不贵，找鲎试剂厂买，鲎试剂和内毒素都是几十块一盒，细菌内毒素检查用水几块钱一盒。（均为10支/盒），所需要的试剂和仪器如下：
材料和设备
1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器（无热原吸头）或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。

鲎试剂凝胶法说明书见：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=161
中国药典2005版细菌内毒素检查法：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=135

[ 本帖最后由 flyjet 于 2009-3-30 14:11 编辑 ]

忘忧草

感谢，我会留意这个问题。:handshake :handshake :handshake :handshake

沧海一粟

你这个就是化验单，没有具体的检测方法呀！:o

沧海一粟

谢谢！我们医院是做鲎试验的，明天我拿这个标准去核对一下，他们做的对不对！:lol

依依

我医院目前想做鲎试剂，除了相应试剂以外，还需要什么特殊设备吗？

flyjet

原帖由 依依 于 2009-4-7 14:23 发表

                               
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我医院目前想做鲎试剂，除了相应试剂以外，还需要什么特殊设备吗？

不用特殊仪器，基本上所有的医院或药厂实验室都有。看看凝胶法鲎试剂的说明书吧！
来源：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=161

凝胶法鲎试剂使用说明书
【名称】
通用名：鲎试剂
英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate （简称TAL）
汉语拼音：hou shi ji
本品主要成份为B因子、C因子、凝固酶原、凝固蛋白原。
【用途】专用于细菌内毒素检查。
【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。
【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【用法】
1．材料和设备
1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。
2．实验操作
2.1 稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）1支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。
2.2 TAL试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于TAL试剂中，轻轻振摇至少30S至试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。
2.3 检查操作
2.3.1 取分装有0.1ml 鲎试剂溶液的10×75mm试管或复溶后的0.1ml /支规格的鲎试剂原安瓿8支，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。
2.3.2 每支供试品管加入0.1ml供试品；阴性对照管加入0.1ml检查用水；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ内毒素的供试品。
2.3.3 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何的振动。
2.4 结果判断
2.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
2.4.2 阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。
【注意事项】
1.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。
2. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250℃干烤至少60min，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
3.当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核试验”。
4.有些物质可能引起假阳性或假阴性，所以第一次使用本品，供试品必须进行干扰实验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“干扰试验”。
5.若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水或实验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或标准内毒素的稀释有误；供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。
【贮藏条件】避光，阴凉处保存。
【批准文号】[88]卫药准字SJ-02号
【规    格】0.1ml、0.5ml、1ml、2ml
【包    装】安瓿10支装、抗生素瓶10瓶装
【产品批号】见外盒
【生产日期】见外盒
【有效期至】见外盒
【生产企业】
公司名称：厦门鲎试剂实验厂有限公司
公司地址：厦门海沧新阳工业区新嘉路131号（361022）
销售电话：（0592）2085561、2095294
销售传真：（0592）2095294
网    址：www.houshiji.com

chengjunwen

我院有4台血液透析仪，准备有一台专门作传染病人，请问不同传染病人谁先谁后，由于透析病人多如何灭菌

西北耗子王

能否提供厦门鲎试剂厂的价格、规格等信息？

依依

原帖由 flyjet 于 2009-4-9 13:55 发表

                               
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不用特殊仪器，基本上所有的医院或药厂实验室都有。看看凝胶法鲎试剂的说明书吧！
来源：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=161

凝胶法鲎试剂使用说明书
【名称】
通用名：鲎试剂
英文名 ...

据我院以前做此项工作的人讲，需要特殊的设备，大约19万元。不知道他说的对不对，还是故意忽悠我。能否具体一些吗？

flyjet

凝胶法最主要是温度要37度而且要恒温，所以一台恒温水浴箱（37±1℃）是必不可少的。
内毒素工作品稀释时需要混匀15分钟，而且强度要大，否则会混合不均匀，造成假阳性或假阴性，所以旋涡混合器也是少不了的。
有这2样加上试剂和耗材就可以开展内毒素定性（限量）检测了。

如果仅做几次定性内毒素试验，买一台19万的仪器蒙灰尘您觉得划的来吗？
如果需要做定量检测，可以看经费多不多，不多可以买显色基质鲎试剂盒，一台普通分光光度计就可以检测。如果经费多可以买台内毒素检测仪器，可以挑厦门鲎试剂厂的，价格〈〈15万，一机多用，除内毒素试验外还具有普通酶标仪功能，厂家还送配套试剂。配合鲎试剂厂家的定量鲎试剂，每个测试的成本可以控制在10元以内。

常用产品及规格
鲎试剂（凝胶法，定性）  0.1 ml/支     透析水等最常用灵敏度0.5EU，0.25EU
细菌内毒素工作品            10EU/支             内毒素标准品，阳性对照用
细菌内毒素检查用水             2 ml/支             溶解鲎试剂或内毒素或稀释样品及印行对照
无热原试管                  10×75mm      稀释内毒素用
已除热原吸头（200ul）              5支/包             配合移液枪使用
旋涡混合器                             XH-B型             混匀内毒素（注意，鲎试剂手动溶解即可）

定量：
显色基质定量法鲎试剂盒   28测试/盒     配合分光光度计或酶标仪使用可检测至0.005EU/ml
显色基质定量法鲎试剂盒   56测试/盒       
显色基质定量法鲎试剂盒   70测试/盒       

注意:目前有部分商家利用部分用户对鲎试剂不太了解的情况大肆鼓吹所谓的凝胶快速检测鲎试剂,并以天价推销.这些商家所谓的凝胶法快速内毒素检测试剂实际上就是国内普通的凝胶法鲎试剂(比如国内标示的0.1ml 0.25EU/ml的鲎试剂).
鲎试剂不存在所谓快速检测试剂盒。
内毒素试验反应速度与内毒素浓度成正比，浓度越高反映速度越快。比如使用0.5EU鲎试剂检测自来水，60s内出现浑浊，5-6分钟即形成坚实凝胶。10倍稀释液体2分钟即浑浊，11分钟形成坚实凝胶。50倍稀释液体15分钟形成凝胶。药典规定保温60分钟±2分钟。

拒绝暴利,明白消费，不要忽悠。购买鲎试剂及相关产品请找专业鲎试剂厂家，还有不清楚的地方可以询问厦门鲎试剂厂。专业的人做专业的事，某些商家总是说“热源试验”，“无热源耗材”，专业的人不会出现这种低级的错误。

寒梅

以上各位说的都是内毒素定性试验，但透析器复用操作规范要求定量，目前一些大医院即三甲医院自己都没有办法做，何况我们县市级医院，不知怎么办？

lyqlhq123

我还是不太明确该怎样做，我们化验室的人说不会做，只好我们自己做了，

who

可送当地药检所，他们的报告应该正确又有权威，每季一次不麻烦

xiaoxiaofangf

报告单很简洁明了，但应该有鲎试剂的批号就更全了。

海内知己

5# flyjet


谢谢补充!!!:handshake

海内知己

其具体检测方法如下:
     检查法：取装有 0.1ml 鲎试剂溶液的 10mm×75mm 试管或 0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿 6 支，其中 2 支加入 0.1ml 或 0.2ml 供试品溶液(其稀释倍数不得超过 MVD)作为供试品管，2 支分别加入 0.1ml 或 0.2ml 用 BET 水将 CSE 制成的 2.0λ 和 0.25λ 浓度的标准内毒素溶液，1 支加入 0.1ml 或 0.2mlBET 水作为阴性对照，1 支加入 0.1ml 或 0.2ml 供试品阳性对照溶液（相当于用供试品溶液将 CSE 制成 2λ 浓度的内毒素溶液）作为阳性对照管。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入 37℃±1℃ 水浴或适宜恒温器中，保温 60min±2min。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
    结果判断：将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转 180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为(+)；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）。供试品 2 管均为（-），应认为符合规定。当供试品的稀释倍数等于 MVD 时，如 2 管均为（+），应认为不符合规定；如两管中 1 管为（+），1 管为（-），按上述方法复试，其中供试品管增加为 4 管，供试品 4 管中如有 1 管为（+），即认为不符合规定。若第一次试验时供试品的稀释倍数小于 MVD 而结果出现 2 管均为（+）或 2管中 1 管为（+），1 管为（-）时，按同样方法复试和判定，复试时要求将其稀释至 MVD 。加入标准内毒素溶液的 2 管中最大浓度（2.0λ）管应为(+)，最低浓度(0.25λ)管应为(-)。供试品阳性对照均应为（+），阴性对照均应为（-），否则试验无效。