医疗机构污水监测方法

吕庆排

咨询老师们：医疗机构污水处理后的粪大肠菌群监测方法 ，具体该怎么做。谢谢！

蔚蓝波西

医疗机构污水处理后的粪大肠菌群应由当地疾控中心负责采样及监测。一般每年进行1~2次。

红番茄

我们是当地质量监督所负责采样及监测。一般每年进行1~2次

jcyyhlb

谢谢老师的回答，学习了。

谷子

具体操作方法可参考：医院污水排放标准

chenmeili

医疗机构污水处理方法，应该每一个医院都有自己的处理方法！

晴朗的天空

谢谢老师的回答，学习了。

七院康波

每月监测一次粪大肠菌群，每季度监测一次沙门菌，每半年监测仪次志贺菌。

黎卫士

    医疗机构污水排放标准GB18466-2005
    6取样与监测
  6.1污水取样与监测
  6.1.1应按规定设置科室处理设施排出口和单位污水外排口，并设置排放口标志。
  6.1.2表1第16-22项，表2第15-21项在科室处理设施排出口取样，总A、总B在衰变池出口取样监测。其它污染物的采样点一律设在排污单位的外排口。
  6.1.2医疗机构污水外排口处应设污水计量装置，并宜设污水比例采样器和在线监测设备。
  6.1.3 监测频率
  6.1.3.1粪大肠菌群数每月监测不得少于1次。采用含氯消毒剂消毒时，接触池出口总余氯每日监测不得少于2次（采用间歇式消毒处理的，每次排放前监测）。

附录 A
（规范性附录）
医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法

A1 仪器和设备
A1.1 高压蒸汽灭菌器。
A1.2 干燥灭菌箱。
A1.3 培养箱：37℃。
A1.4 恒温水浴箱。
A1.5 电炉。
A1.6 天平。
A1.7 灭菌平皿。
A1.8 灭菌刻度吸管。
A1.9 酒精灯
A2 培养基和试剂
A2.1 乳糖胆盐培养液
A2.1.1成分
蛋白胨             20g
猪胆盐（或牛、羊胆盐）     5g
乳糖              5g
0.4％溴甲酚紫水溶液      2.5mL
蒸馏水             1000mL
A2.1.2 制法
将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到7.4，加入指示剂，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。115℃下灭菌20min。贮存于冷暗处备用。
A2.2 三倍浓度乳糖胆盐培养液
A2.2.1成分
蛋白胨             60g
猪胆盐（或牛、羊胆盐）     15g
乳糖              15g
0.4％溴甲酚紫水溶液      7.5mL
蒸馏水             1000mL
A2.2.2 制法
制法同附录A2.1.2。
A2.3 伊红美兰培养基（EMB培养基）
A2.3.1 成分
蛋白胨             10g
    乳糖              10g
    磷酸氢二钾           2g  
    琼脂              20g
    2％伊红水溶液          20mL
    0.5％美蓝水溶液         13mL
    蒸馏水             1000mL
A2.3.2 制法
将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解，再加入蒸馏水补足至1000mL，调整pH至7.2～7.4。趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖，混匀，定量分装于烧瓶内，115℃灭菌20min。作为储备培养基贮存于冷暗处备用。
临用时，加热融化储备培养基，待冷至60℃左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一定量的已灭菌的2％伊红水溶液和0.5％美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡）。倾注平皿备用。
A2.4 乳糖蛋白胨培养液
A2.4.1成分
蛋白胨             10g
牛肉膏             3g
乳糖              5g
氯化钠             5g
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液     1mL
蒸馏水             1000mL
A2.4.2 制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。115℃下灭菌20min。贮存于冷暗处备用。
A2.5 革兰氏染色液
A2.5.1 结晶紫染色液
结晶紫             1g
95％乙醇溶液          20mL
1％草酸铵水溶液        1000mL
将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵水溶液混合。
A2.5.2 革兰氏碘液
碘               1g
碘化钾             2g
蒸馏水             300mL
将碘与碘化钾混合，加入蒸馏水少许，充分摇匀，待完全溶解，再加入蒸馏水至300mL。
A2.5.3 脱色液
95％乙醇。
A2.5.4 沙黄复染液
沙黄              1g
95％乙醇            2g
蒸馏水             90mL
将沙黄溶于95％乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
A2.6 染色法
染色的基本步骤为：1）涂片：在载玻片上滴加一滴生理盐水，用灭菌的接种环取菌落少许，与生理盐水混匀，涂布成薄膜；2）干燥：在室温中使自然干燥；3）固定：将涂片迅速通过火焰2～3次，以载玻片反面接触皮肤，热而不烫为度；4）染色：滴加结晶紫染色液，染色1min，水洗；5）媒染：滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；6）脱色：滴加95％乙醇脱色，约30s，水洗；7）复染：滴加复染液，复染1min，水洗。
革兰氏阳性菌染色后呈紫色，革兰氏阴性菌染色后呈红色。
注：亦可用1：10稀释的石炭酸复红染色液作复染剂，复染时间为10s。
A3 检验程序
检验程序见图A.
A4 操作步骤
A4.1 样品准备
A4.1.1 污水
污水样品应至少取200mL，使用前应充分混匀。
根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10mL、1mL、0.1mL。粪大肠菌群数较多时接种量为1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。
接种量少于1mL时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1mL、0.01mL时，取稀释比分别为1:10、1:100。其它接种量的稀释比依此类推。
1:10稀释样品的制作方法为：吸取1mL水样，注入到盛有9mL灭菌水的试管中，混匀，制成1:10稀释样品。因此，取1mL1:10稀释样品，等于取0.1mL污水样品。其它稀释比的稀释样品同法制作。
注1：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
A4.1.2 污泥
污泥样品应至少取200g，使用前应充分混匀。
根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的污泥样品接种量一般为0.1g、0.01g、0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01g、0.001g、0.0001g或0.001g、0.0001g、0.00001g等。
污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1g、0.01g、0.001g的稀释样品制作方法如下：取20g污泥样品，加入到三角烧瓶中，加灭菌水使成200mL，混匀，制成1:10稀释样品。吸取1:10稀释样品1mL，注入到盛有9mL灭菌水的试管中，混匀，制成1:100稀释样品。按同法制成1:1000稀释样品。接种1mL1:10、1:100、1:1000稀释样品等于接种0.1g、0.01g、0.001g污泥样品。
注1：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
A4.2 发酵试验
将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，44℃培养24h。样品接种体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定：
样品为污水时，取三个接种量、每个接种量的样品分别接种于5个试管内，共需15个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10mL，吸取10mL样品接种于装有5mL三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量为1mL时，吸取1mL样品接种于装有10mL普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量少于1mL时，吸取1mL稀释样品接种于装有10mL普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。
样品为污泥时，取三个接种量、每个接种量的稀释样品分别接种于3个试管内，共需9个试管。9个试管中，各装有10mL乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1mL。
A4.3 平板分离
大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h培养后，将产酸的试管内培养液分别划线接种于EMB培养基上。置于37℃培养箱中，培养18～24h。
A4.4 鉴定
挑选可疑粪大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落；2）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；3）淡紫红色，中心色较深的菌落。
上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落1～3个接种于盛有5mL乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内，置于44℃培养箱中培养24h。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。
A5 计数
根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表A1或A2可得100mL污水或1g污泥中粪大肠菌群MPN值。
由于表A1和表A2是按一定的三个10倍浓度差接种量设计的（污水接种量为10mL、1mL和0.1mL，污泥接种量为0.1g、0.01g和0.001g），当采用其他三个10倍浓度差接种量时，需要修正表内MPN值，具体方法如下：
表内所列污水（污泥）最大接种量增加10倍时表内MPN值相应降低10倍；污水（污泥）最大接种量减少10倍时表内MPN值相应增加10倍。如污水接种量改为1mL、0.1mL和0.01mL时，A1表内MPN值相应增加10倍。其它的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。
由于A1表内MPN值的单位为每100mL污水样品中MPN值，而污水以1L为报告单位，因此需将查A1表得到的MPN值乘上10，换算成1L污水样品中的MPN值。



表A1 污水中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表
（污水样品接种量为5份10mL水样，5份1mL水样和5份0.1mL水样）
阳性管数 每100mL水样中MPN 阳性管数 每100mL水样中MPN 阳性管数 每100mL水样中MPN
接种100mL水样 接种10mL水样 接种0.1mL水样 接种100mL水样 接种10mL水样 接种0.1mL水样 接种100mL水样 接种10mL水样 接种0.1mL水样
0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 13
0 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 17
0 0 2 4 2 0 2 9 4 0 2 21
0 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 25
0 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 30
0 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 36
0 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 17
0 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 21
0 1 2 6 2 1 2 12 4 1 2 26
0 1 3 7 2 1 3 14 1 1 3 31
0 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 36
0 1 5 11 2 1 5 19 4 1 5 42
0 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 22
0 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 26
0 2 2 7 2 2 2 14 4 2 2 32
0 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 38
0 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 44
0 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 50
0 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 27
0 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 33
0 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 39
0 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 45
0 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 52
0 3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 59
0 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 34
0 4 1 9 2 4 1 17 4 4 1 40
0 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 47
0 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 54
0 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 62
0 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 69
0 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 41
0 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 48
0 5 2 13 2 5 2 23 4 5 2 56
0 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 64
0 5 4 17 2 5 4 29 4 5 4 72
0 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 81

阳性管数 每100mL水样中MPN 阳性管数 每100mL水样中MPN 阳性管数 每100mL水样中MPN
接种100mL水样 接种10mL水样 接种0.1mL水样 接种100mL水样 接种10mL水样 接种0.1mL水样 接种100mL水样 接种10mL水样 接种0.1mL水样


1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 23
1 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 31
1 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 43
1 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 58
1 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 76
1 0 5 12 3 0 5 23 5 0 5 95
1 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 33
1 1 1 6 3 1 1 14 5 1 1 46
1 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 63
1 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 84
1 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 110
1 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 130
1 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 49
1 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 70
1 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 94
1 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 120
1 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 150
1 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 180
1 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 79
1 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 110
1 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 140
1 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 180
1 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 210
1 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 250
1 4 0 11 3 4 0 21 5 4 0 130
1 4 1 13 3 4 1 24 5 4 1 170
1 4 2 15 3 4 2 28 5 4 2 220
1 4 3 17 3 4 3 32 5 4 3 280
1 4 4 19 3 4 4 36 5 4 4 350
1 4 5 22 3 4 5 40 5 4 5 430
1 5 0 13 3 5 0 25 5 5 0 240
1 5 1 15 3 5 1 29 5 5 1 350
1 5 2 17 3 5 2 32 5 5 2 540
1 5 3 19 3 5 3 37 5 5 3 920
1 5 4 22 3 5 4 41 5 5 4 1600
1 5 5 24 3 5 5 45 5 5 5 >1600

表A2 污泥中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表
（污泥样品接种量为3份0.1g泥样，3份0.01g泥样和3份0.001g泥样）
阳性管数 每1g泥样中MPN 阳性管数 每1g泥样中MPN 阳性管数 每1g泥样中MPN
接种0.1 g污样管 接种0.01 g污样管 接种0.001 g污样管 接种0.1 g污样管 接种0.01 g污样管 接种0.001 g污样管 接种0.1 g污样管 接种0.01 g污样管 接种0.001 g污样管
0 0 0 <3 1 2 0 11 3 0 0 23
0 0 1 3 1 2 1 15 3 0 1 39
0 0 2 6 1 2 2 20 3 0 2 64
0 0 3 9 1 2 3 24 3 0 3 95
0 1 0 3 1 3 0 16 3 1 0 43
0 1 1 6.1 1 3 1 20 3 1 1 75
0 1 2 9.2 1 3 2 24 3 1 2 120
0 1 3 12 1 3 3 29 3 1 3 160
0 2 0 6.2 2 0 0 9.1 3 2 0 93
0 2 1 9.3 2 0 1 14 3 2 1 150
0 2 2 12 2 0 2 20 3 2 2 210
0 2 3 16 2 0 3 26 3 2 3 290
0 3 0 9.4 2 1 0 15 3 3 0 240
0 3 1 13 2 1 1 20 3 3 1 460
0 3 2 16 2 1 2 27 3 3 2 1100
0 3 3 19 2 1 3 34 3 3 3 >1100
1 0 0 3.6 2 2 0 21
1 0 1 7.2 2 2 1 28
1 0 2 11 2 2 2 35
1 0 3 15 2 2 3 42
1 1 0 7.3 2 3 0 29
1 1 1 11 2 3 1 36
1 1 2 15 2 3 2 44
1 1 3 19 2 3 3 53
A6 检验结果报告
根据粪大肠菌群MPN值，报告1L污水或1g污泥样品中粪大肠菌群MPN值。

依依

下次的每周组照，我会上传我制作的组照，可以关注下。

吕庆排

依依 发表于 2014-1-6 18:12
下次的每周组照，我会上传我制作的组照，可以关注下。

谢谢老师，等待您的下一个资料！

春燕2014

我们医院是每个月做细菌监测，每天做余氯监测

韩玉梅

我们医院是每个月做细菌监测，每天做余氯监测