消毒液微生物监测中和剂溶液请教

88-88259 · 发表于 2013-8-29 14:27

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本帖最后由谷子于 2013-8-30 10:27 编辑

《医疗机构消毒技术规范》
A.7.2.1.1 用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0 ml被检消毒液，加入9 ml中和剂中混匀。醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1 %硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3 %吐温80和0.3 %卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0.3 %甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3 %；也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。
===================
现在问题是中和剂配制上，肉汤配制的中和剂符合要求吗？是用生理盐水配制的中和剂？还是用无蒸馏水配置？疑惑中！求解相关规范！

吴晓梅 · 发表于 2013-8-29 15:26

这段话不是解释的很清楚了吗？什么样的消毒剂就用什么样的中和剂。

88-88259 · 发表于 2013-8-29 15:39

txyy_ygk 发表于 2013-8-29 15:26

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这段话不是解释的很清楚了吗？什么样的消毒剂就用什么样的中和剂。

没写清楚哦。那我拿蒸馏水来配置中和剂您看行不行？

lxl20020599 · 发表于 2013-8-29 15:52

说的很清楚啊，配置使用肉汤为溶剂。

LEK-感控style · 发表于 2013-8-29 16:17

用含有相应中和剂的生理盐水或磷酸盐缓冲液配制

88-88259 · 发表于 2013-8-29 16:45

本帖最后由 88-88259 于 2013-8-29 16:47 编辑

LEK-感控style 发表于 2013-8-29 16:17

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用含有相应中和剂的生理盐水或磷酸盐缓冲液配制

有规范吗？
我请教了一名从事院感检验资深人员：有的需要蒸馏水、有的需要生理盐水、有的需要肉汤、有的需要磷酸盐缓冲液！
就是不明白为什么？

吴晓梅 · 发表于 2013-8-29 16:54

88-88259 发表于 2013-8-29 16:45

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有规范吗？
我请教了一名从事院感检验资深人员：有的需要蒸馏水、有的需要生理盐水、有的需要肉汤、有 ...

是呀，这个老师说的没错，因为各种消毒剂的成分不同，所以所需的中和剂也不同。

LEK-感控style · 发表于 2013-8-29 17:04

88-88259 发表于 2013-8-29 16:45

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有规范吗？
我请教了一名从事院感检验资深人员：有的需要蒸馏水、有的需要生理盐水、有的需要肉汤、有 ...

没有规范，我觉得这个都可以，关键是里面的中和剂能够完全中和消毒剂

潘盼 · 发表于 2013-8-29 17:18

市场上已经有一次性相应中和剂

动飞扬 · 发表于 2013-8-29 17:43

txyy_ygk 发表于 2013-8-29 16:54

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是呀，这个老师说的没错，因为各种消毒剂的成分不同，所以所需的中和剂也不同。

非常赞同您的观点，应根据规范中提示的不同消毒剂选择不同中和剂，这样监测结果才是准确、有意义的

liser · 发表于 2013-8-29 19:18

本帖最后由 liser 于 2013-8-29 19:21 编辑

动飞扬发表于 2013-8-29 17:43

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非常赞同您的观点，应根据规范中提示的不同消毒剂选择不同中和剂，这样监测结果才是准确、有意义的

他的意思是用什么溶液配制中和剂？使用肉汤、生理盐水、还是蒸馏水？随便选吗？

谷子 · 发表于 2013-8-30 10:15

本帖最后由谷子于 2013-8-30 10:16 编辑

任教授主编的《实用医院感染监测方法学》第八章医院消毒药械监测第一节第二点：“无菌吸管和试管，无菌平皿，含相应中和剂的磷酸盐缓冲液，营养琼脂培养基”，说明所有消毒剂中和剂用磷酸盐缓冲液配制。
楼主不必纠结了！

动飞扬 · 发表于 2013-8-31 23:49

liser 发表于 2013-8-29 19:18

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他的意思是用什么溶液配制中和剂？使用肉汤、生理盐水、还是蒸馏水？随便选吗？

是按照规范中所提示的不同的消毒液选择不同的中和剂，这样配制的中和剂对做消毒液监测才有意义

动飞扬 · 发表于 2013-8-31 23:51

谷子发表于 2013-8-30 10:15

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任教授主编的《实用医院感染监测方法学》第八章医院消毒药械监测第一节第二点：“无菌吸管和试管，无菌平 ...

老师的解答带给了我新的理解，增长了知识，非常感谢您的指导

没道理 · 发表于 2013-9-1 00:05

现在问题是中和剂配制上，肉汤配制的中和剂符合要求吗？是用生理盐水配制的中和剂？还是用无蒸馏水配置？疑惑中！求解相关规范

肉汤的配制，楼主可以看看2012年版的《消毒技术规范》中附录B，里面有个B。5的
消毒试验用试剂和培养基配方
B．1 磷酸盐缓冲液（PBS。0.03mol/L，pH7.2）
无水磷酸氢二钠                            2.83g
磷酸二氢钾                                  1.36g
蒸馏水加至                               1000mL
将各成分加入到1000mL蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20min备用。
B．2 无菌检验用洗脱液
吐温―80                                     1g
蛋白胨                                        10g
氯化钠                                     8.5g
蒸馏水                                     1000mL
将各成分加入到1000mL0.03mol/L  PBS液中，加热溶解后调pH至7.2～7.4，与121℃压力蒸汽灭菌20min备用。
B．3 营养琼脂培养基
蛋白胨                                     10g
牛肉膏                                     5g
氯化钠                                     5g
琼脂                                        15g
蒸馏水                                  1000mL
除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸气灭菌20min备用。
B．4 溴甲酚紫蛋白胨培养液
蛋白胨                                  10g
葡萄糖                                     5g
可溶性淀粉                               1g
溴甲酚紫乙醇溶液                         10mL
蒸馏水                               1000mL
将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.0～7.2，加入1%溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装，每管5mL，于115℃压力蒸汽灭菌30min。置4℃冰箱备用。
B.5 营养肉汤培养基
蛋白胨                                  10g
牛肉膏                                     5g
氯化钠                                     5g
蒸馏水                               1000ml
将各成分溶解于蒸馏水中，调  pH 至 7.2～7.4，分装，于 121℃ 压力蒸汽灭菌 20min备用。
B.6  嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基
蛋白胨                                  10g
牛肉膏                                     3g
可溶性淀粉                               1g
葡萄糖                                     1g
琼脂                                     20g
蒸馏水                               1000ml
以上各成分蒸馏水溶解，调pH 至7.0～7.2，装瓶，经115℃压力蒸汽灭菌30min后使用。
B.7  0.5% 葡萄糖肉汤培养基
蛋白胨                                  10g
氯化钠                                     5g
葡萄糖                                     5g
肉浸液                               1000ml
取蛋白胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调 pH 至弱碱性，煮沸、加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调 pH 至7.0～7.4，分装，于 115℃ 压力蒸汽灭菌 30min。
B.8  稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）。
胰蛋白胨                                  1.0g
氯化钠                                  8.5g
先用900ml以上蒸馏水溶解，并调节pH值在7.0±0.2（20℃），最终用蒸馏水加至1000ml，分装后，经121℃压力蒸汽灭菌后使用。
B.9  需氧-厌氧菌琼脂培养基
酪胨(胰酶水解)                            15g
牛肉膏                                     3g
葡萄糖                                     5g
氯化钠                                  2.5g
L-胱氨酸                               0.5g
硫乙醇酸钠                               0.5g
酵母浸出粉                               5g
新鲜配制的 0.1% 刃天青溶液             1.0ml
(或新配制的 0.2% 亚甲蓝溶液             0.5ml
琼  脂                               0.5g~0.7g
蒸馏水                               1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调 pH 至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调 pH 至 6.9～7.3，分装于 115℃压力蒸汽灭菌 30min。
B.10  无菌试验用真菌培养基
磷酸二氢钾(KH2PO4)                      1g
硫酸镁(MgSO4•7H2O)                      0.5g
蛋白胨                                     5g
葡萄糖                                     10g
蒸馏水                                  1000ml
除葡萄糖外，上述各成分加入蒸馏水内，微温溶解后，调节pH 约6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀滤清，调pH 使灭菌后为6.4±0.2，分装，115℃压力蒸汽灭菌 20min备用。
B.11  血琼脂培养基
营养琼脂                               100 ml
脱纤维羊血(或兔血)                      10 ml
将营养琼脂加热熔化待冷至 50℃ 左右，以无菌操作将 10ml 脱纤维血加入后摇匀，倒平皿置冰箱备用。
B.12  注意事项
配制培养基注意事项如下：
a) 配制培养基的容器不宜用铜锅或铁锅，以免影响细菌生长；
b) 培养基用的试管口和三角烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮纸包好；
c) 试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过 1 个月。

liser · 发表于 2013-9-11 17:44

谷子发表于 2013-8-30 10:15

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任教授主编的《实用医院感染监测方法学》第八章医院消毒药械监测第一节第二点：“无菌吸管和试管，无菌平 ...

我看了这本书，对于“细菌污染定量的检测”使用PBS缓冲液配置的中和剂。
那“使用中的消毒剂”拿什么来配置中和剂？
哪位大虾可以提供碘伏、含氯消毒剂、洗必泰、戊二醛、消毒内镜、灭菌内镜的需要采集溶液及中和剂使用的配置溶液表，希望有出处，不胜感谢

liser · 发表于 2013-9-11 18:01

本帖最后由 liser 于 2013-9-11 18:07 编辑

找到的资料和大家分享：你们医院是这样配置中和剂的吗？
---------------------------------------------------
1、磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）

无水磷酸氢二钠 2.83g

磷酸二氢钾 1.36g

蒸馏水加至 1000ml

将各成分加入到1000ml 蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH 至 7.2～7.4，于 121℃ 压力蒸气灭菌20min备用。

2、硫代硫酸钠中和剂（0.1-1.0%） pH7.2-7.4

0.03mol/L磷酸盐缓冲液 100 ml

硫代硫酸钠 0.1-1.0g

于 121℃ 压力蒸气灭菌 15min备用。

3、吐温80中和剂（0.5-1.0%） pH7.2-7.4

0.03mol/L磷酸盐缓冲液 100 ml

吐温80 0.5-1.0g

于 121℃ 压力蒸气灭菌 15min备用。

4、2%戊二醛中和剂：

500 ml PBS+2.5g 甘氨酸（氨基乙酸）+2.5g卵磷脂+2.5g吐温80

5、碘伏中和剂：1000 ml PBS+硫代硫酸钠10g

6、75%乙醇中和剂：3%吐温PBS，如500 ml PBS+1.5g吐温80

7、酸性氧化电位水中和剂：0.5%硫代硫酸钠PBS缓冲液（pH7.2）如“500 mlPBS+2.5 g硫代硫酸钠

8、对于特殊消毒剂的中和剂，根据厂家提供的资料选用合适的中和剂。

---------------------------------------------------------------------------

liser · 发表于 2013-9-11 18:37

根据医院消毒卫生标准GB15982-1995中规定：
对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；
对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠；
对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）吐温80和0.3%卵磷脂；
对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；
对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）吐温80，以中和被检样液的残效作用。

hongd · 发表于 2013-10-25 22:19

本帖最后由 hongd 于 2013-10-25 22:22 编辑

请问各位老师，次氯酸钠的中和剂是不是用硫代硫酸钠？其浓度使用0.1%～1.0%的还是用0.1%～0.5%的？谢谢！

刘志广 · 发表于 2015-3-19 11:24

txyy_ygk 发表于 2013-8-29 15:26
这段话不是解释的很清楚了吗？什么样的消毒剂就用什么样的中和剂。

我想问问怎么个清楚法呢？买的硫代硫酸钠卵磷脂甘氨酸都是粉剂，那请您给说说怎么给配置

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