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大家有没有留意过艰难梭菌-抗生素相关性腹泻的问题

 火.. [复制链接]
发表于 2013-3-8 13:30 | 显示全部楼层 |阅读模式

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如题,艰难梭菌近来的耐药性不容忽视

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发表于 2013-3-8 13:54 | 显示全部楼层
关注过,楼主是不是考虑多谈一谈艰难梭菌近来的耐药问题,或上传一些文献
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发表于 2013-3-8 14:02 | 显示全部楼层
《浙江医学》***波 吴微珍 鲁海峰等人题为:艰难梭菌相关性腹泻患者50例临床特征及其病原菌耐药性分析的文章  目的研究艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)患者的临床特征及艰难梭菌的毒素基因和抗菌药物耐药性情况。方法对163例医院感染性腹泻患者采用选择性培养基培养艰难梭菌,用常规PCR法分别检测艰难梭菌毒素A、B的基因tcdA和tcdB,并根据检测结果分为CDAD组和非CDAD组,记录两组患者的临床特征;同时采用E—test法检测其中的产毒艰难梭菌对甲硝唑、万古霉素、利福平、克林霉素和莫西沙星的敏感性。结果在163份临床标本中共培养得到50株(30.7%)产毒艰难梭菌;两组在发热、水样便发生率和血清白蛋白水平方面的差异均有统计学意义(均P〈0.05)。A^+B^+为33株(66O%),A^-B^+为17株(34.0%);产毒株对甲硝唑、万古霉素、利福平、克林霉素和莫西沙星的耐药率分别为0%、0%、18%、68%和48%。结论艰难梭菌A^-B^+菌株有较高的分离率,50株艰难梭菌均对甲硝唑和万古霉素敏感,但对克林霉素和莫西沙星耐药率较高。

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 楼主| 发表于 2013-3-8 14:10 | 显示全部楼层

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点击附件上传  发表于 2013-3-8 14:12
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发表于 2013-3-8 14:11 | 显示全部楼层
谢谢老师,分享了!!!!!!!!!!!
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 楼主| 发表于 2013-3-8 14:15 | 显示全部楼层
上传成功了吗?很好的一篇文章
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 楼主| 发表于 2013-3-8 14:18 | 显示全部楼层
版主,请看看是否传上去了,我传了2次,看不到啊,显示上传完成了
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 楼主| 发表于 2013-3-8 14:21 | 显示全部楼层
清清 发表于 2013-3-8 14:02
《浙江医学》***波 吴微珍 鲁海峰等人题为:艰难梭菌相关性腹泻患者50例临床特征及其病原菌耐药性分析的文章 ...

嗯,是的克林霉素耐药问题非常突出,而且和国外的菌株相比,我们的菌株往往多重耐药
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发表于 2013-3-8 15:59 | 显示全部楼层
更应该注意腹泻、肠道感染的抗生素治疗。
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发表于 2013-3-8 15:59 | 显示全部楼层
艰难梭菌感染性腹泻只是在学习中知道有关问题,在身边没有见到发生过,楼上老师上传的资料学习了,谢谢!
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 楼主| 发表于 2013-3-8 16:30 | 显示全部楼层
为大家提供点资料吧:

艰难梭菌(Clostridium difficile, C.difficile) 作为健康新生儿肠道中正常菌群,发现于1935年。艰难梭菌为具有芽胞结构的革兰阳性厌氧杆菌,是人与动物伪膜性肠炎( Pseudomembranous colitis, PMC)和抗生素相关性腹泻的主要病原菌, 至少产生A、B两种毒素。随着广谱抗菌药物的广泛应用,全球范围内艰难梭菌相关性腹泻 (Clostridium diff icile associated diarrhea, CDAD)的发生率不断提高。近年来已观察到CDAD的暴发流行[1],由于流行株的基因变异,产毒能力增加而致患者病死率增加。因此,艰难梭菌已经成为医院感染的常见病原菌。
一 分类和基因组特征
梭菌属(Clostridum),是严格厌氧杆菌,有中生或端生耐热芽胞,芽胞常使细菌膨大。在1998年1月1日生效的梭菌种名有130个,对人致病的梭菌种数相对较少,除艰难梭菌(C.difficile)外,还包括产气荚膜梭菌(C.perfringens)、梭形梭菌(C.clostridioforme)、无害梭菌(C.innocuum)、多枝梭菌(C.ramosum)、丁酸梭菌(C.butyricum)等。
目前,已完成多株艰难梭菌的全基因组测序工作。以经典测序株630为例:长度为4,290,252 nt,GC含量29%,编码百分数为82%,基因数3970,假基因数34.
二 生物安全须知
在《人间传染的病原微生物名录》中,将艰难梭菌的危害程度归为第三类,涉及大量活菌操作和临床样品检测相关实验活动,需在生物安全二级(BSL-2)实验室进行;感染性动物试验,需在动物生物安全二级(ABSL-2)实验条件下进行。非感染性材料的相关操作,可在生物安全一级(BSL-1)实验室中进行。运输艰难梭菌菌种、培养物和临床样本,需按B类感染性材料标准和转运。

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 楼主| 发表于 2013-3-8 16:31 | 显示全部楼层
三 临床特征
临床表现可从轻度、短暂性、自限性腹泻到可致命性、伪膜性结肠炎,一般腹泻多于1 天4 次, 水泻, 多数有痉挛性腹痛。约半数腹泻出现在应用抗生素过程中, 或停用抗生素短期内, 偶有停药数月后发病, 重症出现消耗性腹泻, 每日可达20~ 30次。症状包括腹泻、腹痛、发热、白细胞增高、粪便白细胞、中毒性巨结肠、CT 可显示结肠增厚、内镜和活检可见结肠特征性改变:散在、点状、黄、棕、绿色斑块。偶尔表现为急腹症及暴发性致死性结肠炎。腹部X光片可见麻痹性肠梗阻及“拇指纹”症。可并发肠穿孔、电解质紊乱等。
四 流行病学特征
1.病原体:艰难梭菌,为革兰氏阳性芽胞菌。最近欧美国家的流行株为核糖体027型和核糖体078型。
2.流行概况:在2003年加拿大发生CDAD暴发之前,艰难梭菌曾被认为仅引起简单的临床腹泻。最近,欧美许多国家相继发生CDAD的暴发流行,目前艰难梭菌已成为欧美排名第一的“超级臭虫”。美国CDC报道,截至2007年11月,高致病性和高病死率的艰难梭菌核糖体027 型,至少引起了美国38个州的院内感染暴发(http://www.cdc.gov/ncidod/dhqp/ index.html)。这次流行的菌株其基因发生变异,产毒能力增加,表现出高病死率(并发中毒性巨结肠后,高达65%)和高复发率(20%)特征。在北美发现 027 型后不久,英国、苏格兰、爱尔兰、比利时、法国、奥地利(输入病例)、西班牙(输入病例)、卢森堡、波兰、荷兰、瑞士、丹麦、德国、芬兰和挪威等17个国家也相继出现了CDAD的暴发和流行,亚洲在日本已证实该流行株的存在。欧洲艰难梭菌研究小组(ESGCD)曾在2002年和2005年分别进行了二次调查,报道住院病人发病率分别为11 /10,000和2.45 / 10,000;美国报道其住院病人发病率约为10 - 200 / 10,000。随后在2005年,荷兰等国家出现一种新的高致病性艰难梭菌引起的暴发流行,该菌株为核糖体078型。078型除表现为与核糖体027型一致的高致病性与高病死率外,078型菌株更容易引起年轻人患病,在社区腹泻患者中更为常见。进一步的研究指出,078型艰难梭菌与腹泻的猪分离出的艰难梭菌基因具有高度同源性。
3.贮存宿主:艰难梭菌存在于各种各样的自然环境中,包括土壤、干草、沙、粪便中。该菌同时也是许多动物肠道性疾病的病原体,包括马、狗、猫、鸟类、啮齿类,特别是幼猪。由此提示,动物可以作为人类病原体的贮存宿主。1岁新生儿中约一半在肠道中带有艰难梭菌,随着年龄的增长,其带菌率随之下降。健康****的带菌率为0-3%。
4.传播途径:其主要传播途径为接触性传播,CDAD患者粪便中含有大量艰难梭菌及其芽胞,应用抗生素将造成肠道易感性增加。艰难梭菌可通过口-粪途径定植在结肠, 并可通过与患者、被污染设备或物品(例如便盆、澡盆和电子直肠温度计)直接接触、医护人员间接接触引起院内艰难梭菌感染暴发。
5.潜伏期:抗生素开始使用几天后到抗生素停用后8周内均可发生。
6.传染性:感染病例经过治疗后,约40%成为病原携带者。
7.易感性:CDAD常于使用抗生素以后发生,占所有抗生素腹泻(AAD)的15%~25%,尤以广谱青霉素(氨苄青霉素、阿莫西林)及头孢菌素的应用最甚。胃肠道因素(反复灌肠、鼻胃管插入两天以上的胃肠道操作、肠梗阻等)、抗肿瘤化疗药物、年龄> 60 岁(65岁以上老年人占到了CDAD患者的60%)、女性、严重并发症、长期住院治疗等均易引发CDAD。据报道,目前社区获得性CDAD报道病例明显增多。提示,CDAD对于社区健康人群也已构成威胁。
8.治疗: 约15-23%的病例在停用抗生素后,2-3天内症状缓解,无需其他治疗。对于严重或症状持续时间长的病例、老年或虚弱患者、不能停止抗生素治疗的患者首选甲硝唑治疗。万古霉素常作为二线用药,但对于严重致命性感染、孕妇、10岁以下儿童可作为一线用药。

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 楼主| 发表于 2013-3-8 16:38 | 显示全部楼层
细菌耐药 发表于 2013-3-8 13:54
关注过,楼主是不是考虑多谈一谈艰难梭菌近来的耐药问题,或上传一些文献

这是国内的数据
fidax.pdf (323.19 KB, 下载次数: 3)

fidax.pdf

323.19 KB, 下载次数: 1, 下载积分: 金币 -2 枚

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 楼主| 发表于 2013-3-8 16:39 | 显示全部楼层
chy7508 发表于 2013-3-8 16:38
这是国内的数据

临床分离艰难梭菌188株的耐药性研究[1].pdf (498.5 KB, 下载次数: 0)   中文文献

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 楼主| 发表于 2013-3-8 16:48 | 显示全部楼层
chy7508 发表于 2013-3-8 16:38
这是国内的数据

2.pdf (2.73 MB, 下载次数: 1) 好朋友写的综述,关于艰难梭菌耐药,值得力荐!

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 楼主| 发表于 2013-3-8 17:09 | 显示全部楼层
谢谢斑竹,很受鼓励啊,继续:

五 样本的采集和运输
标本分为粪便标本、肠腔内容物、大肠手术标本或尸检标本等。采集到的标本应置于密封带盖的塑料瓶中常温下尽快送检。也可将标本床旁接种于预还原厌氧灭菌培养基,然后将平板放入厌氧袋中运送(或使用商购的棉拭运送管)。组织块可置密闭厌氧罐中运送,罐内可置各种产气或吸氧装置。粪便标本最好选择10-20ml水样粪便(至少5.0ml或5g),主要用于细菌分离培养和毒力检测以及CDAD的诊断,固体或成形粪便的检测仅用于流行病学调查携带率。粪便标本应在采集2小时内培养,如需保存,应保存于厌氧环境中。标本保存在5℃ ,可在2天内分离到菌株,3天内检测到毒素。
标本采集时应戴手套,脱掉手套后应用肥皂或洗手液洗手。进行肠镜检查应注意防止肠穿孔及由于消毒不彻底而造成流行。
标本包装运输参照B类感染性材料标准,专人传送不少于两层包装,寄送需标准三层包装。2小时内运输无需冷藏。
六 菌株保存
可在20%甘油中,-60℃或更低温度条件下保存数年。具体方法是将四份48小时肉汤培养物转移到含有一份无菌甘油的无菌玻璃瓶中,充分混匀成均一悬液后冷冻。也可将48小时平板培养的若干菌落直接悬浮于20%灭菌脱脂牛奶中,-60℃冷冻。冷冻真空干燥法对菌体的损伤较小,保存时间更长。
七 培养基和培养条件
本菌为严格的专性厌氧菌,生长温度为25-45℃,最适温度为30-37℃。初代培养用平板应新鲜配制,4h内用完或放入充以二氧化碳的不透气密封塑料袋中,4℃保存,1-2d内用完。也可将培养基在使用前放入无氧环境中,使预还原24-48h。常用牛心脑浸液和布氏杆菌肉汤2种基础培养基,加入氯化血红素5ug/ml, 维生素k1 10ug/ml, 0.5%酵母浸出液,5%-10%羊血等制成血平皿。以及CCFA琼脂(环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂)选择培养基。
八 形态学特征
革兰阳性,菌体呈杆状,1.3~1.6×3.1~6.4μm.以周生鞭毛运动。芽胞卵圆形、次端生,后变成端生,较菌体大,故使菌体呈球拍状。在血琼脂,牛心脑浸液琼脂及CCFA等平板上,经48h培养后,菌落直径3-5mm,圆形,略凸起,白色或淡黄色,不透明,边缘不整齐,表面粗糙,不溶血,培养后用Wood紫外线灯照射,菌落可发出淡绿色荧光。

        

           图 1 艰难梭菌纯培养的镜下形态(Ed J. Kuijper 提供)


           

        图 2 艰难梭菌在选择培养基上的形态(Ed J. Kuijper 提供)
九 生物化学鉴定
生化反应不活跃,能酵解葡萄糖和果糖,能分解七叶灵和液化明胶,其它生化反应均为阴性。
十 血清学鉴定
可采用酶联免疫吸附试验,鉴定出A1、A5、A8、A9、 A10、C、 D、F、G、H和K 11个血清型[2],目前,已鉴定出超过20个血清型。
十一 毒力基因检测
艰难梭菌分泌的毒素A和B,  2个毒素分别由tcd A 和 tcd B 基因编码,此外尚存在负向调节基因tcd C, 正向调节基因tcd D以及膜孔蛋白基因tcd E, 以上基因共同构成致病性决定区(Pathogenicity Locus, PaLoc)。tcd C 基因的多态性或部分碱基的缺失可引起毒素A、B产生增加。此外,在某些变异株中可检测到另一种二元毒素(binary toxin),由位于致病性决定区外2个不同位置的染色体基因cdt A和cdt B 编码,cdt A 基因可阻断肌动蛋白片断合成而诱导细胞死亡,cdt B 基因介导毒素与细胞结合并进入细胞。
毒力基因包括tcd A 和 tcd B,cdt A和cdt B等多种,另有tcdD, tcdE, tcdC 等Paloc辅助基因。
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发表于 2013-3-8 19:21 | 显示全部楼层
感谢老师热心无私奉献提供学习机会!
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 楼主| 发表于 2013-3-9 18:32 | 显示全部楼层
艰难梭菌图片.ppt (2.01 MB, 下载次数: 8) 艰难梭菌的图片,
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