【感染科普笔记2023-10-31】探秘病原微生物专栏丨脆弱拟杆菌，脆弱吗？

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作者：孙立红/温海楠（承德医学院附属医院）
审核：宁永忠（北京垂杨柳医院）/蓝雪0816



假如它真的脆弱，它就不会在我们身体内广泛存在；假如它真的脆弱，它就不会引起那么多感染，假如它真的脆弱，我们也就不需要那么关注它的存在。
一、何为脆弱拟杆菌？
根据细菌对氧的需求情况，大体可以分为：需氧菌、兼性厌氧菌和专性厌氧菌，脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)属于专性厌氧菌。
脆弱拟杆菌(B．fragilis)属于拟杆菌属(Bacteroides)，拟杆菌属是临床上最重要的革兰阴性无芽胞厌氧菌，属内有78个种和5个亚种，与人类有关的有10个种，包括脆弱拟杆菌(B．fragilis)、粪拟杆菌(B．caccae)、吉氏拟杆菌(B．distasonis)、屎拟杆菌(B．merdae)、化脓拟杆菌(B．pyogenes)、多毛拟杆菌(B．capillosus)、普通拟杆菌(B．vulgatus)、艾格斯拟杆菌(B．eggerthii)、卵圆拟杆菌(B．ovatus)、粪便拟杆菌(B．stercoris)、多形拟杆菌(B．thetaiotaomicron)和单形拟杆菌(B．uniformis)等。脆弱拟杆菌是其代表菌种 。
1. 脆弱拟杆菌的形态
脆弱拟杆菌是革兰阴性杆菌，大小为(0.8～1.3)um×(1.6～8)μm，两端圆而深染，中间不着色或染色较浅，似为空泡。培养物呈明显的多形性，在液体培养基尤其在含糖的培养基中，为长丝状或其他形状，无芽孢、无鞭毛，可形成荚膜，部分菌株有菌毛。


图1 脆弱拟杆菌 革兰染色（10×100倍）
2. 脆弱拟杆菌的培养特性
它营养要求较高，培养基中加入氯化血红素、维生素K1和胆盐可促进其生长。在厌氧血琼脂平板上35℃培养24～48h后，形成微凸、光滑、边缘整齐、半透明、灰白色、不溶血的菌落。在胆汁七叶苷(BBE)培养基上生长旺盛，菌落较大，能分解胆汁七叶苷，使培养基呈黑色，菌落周围有黑晕。



图2 脆弱拟杆菌（厌氧培养48h）
3. 脆弱拟杆菌的的生化特性
触酶试验阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，不发酵阿拉伯糖、鼠李糖、山梨醇和海藻糖，胆汁七叶苷试验阳性，吲哚试验阴性，耐20%胆盐。
4. 脆弱拟杆菌的的致病性
它常寄生于人的口腔、肠道和女性生殖道，是一种条件致病菌，主要导致内源性感染，可引起女性生殖系统、胸腔、颅内感染及菌血症等，引起的感染比其他厌氧菌更常见，毒力更强，对抗菌药物更耐药。
脆弱拟杆菌致病因素是内毒素，内毒素由脂多糖和类脂a构成。脂多糖决定其抗原性，类脂a决定其毒性。由于它的内毒素的化学结构与典型内毒素不同，所以毒性比一般内毒素为低，但发现它的内毒素在体外能抑制中性白细胞的趋化性和吞噬作用。脆弱拟杆菌还能产生β-内酰胺酶，破坏青霉素，故对青霉素有耐药性。本菌还产生肝素酶，这种酶有利于形成血栓性静脉炎和迁徙性脓肿。脆弱拟杆菌还分泌透明质酸酶、DNA酶、神经氨酸酶等，均与其侵袭力有关。脆弱拟杆菌e抗原与其致病性有关，如化脓，白细胞先降低后升高，肝、肺，肾组织病变等。在临床上的无芽胞厌氧菌感染中占有重要的地位。
脆弱拟杆菌和其他无芽胞厌氧菌引起的感染，一般只有在特定条件下才能发生。促进感染的可能因素如下：①屏障作用受损：手术、拔牙和穿孔等使细菌侵入非正常寄居的部位；②菌群失调：长期使用抗生素使体内一种或几种厌氧菌得到优势增长，破坏了正常菌群的平衡。如脆弱拟杆菌对氨基糖苷类抗生素有耐药性；③机体抵抗力降低：在治疗中使用激素、免疫抑制剂或x射线、恶性肿瘤、糖尿病和大面积烧伤等均可造成免疫功能下降；④局部组织供血障碍：如血管损伤、造成局部厌氧微环境，有助于厌氧菌生长繁殖。
脆弱拟杆菌引起的感染具有一下特点：①感染部位接近黏膜表面，发生在口腔、鼻窦、鼻咽部、胸腔、腹腔和肛门会阴附近的炎症、脓疡及其他深部脓疡；②分泌物为血性或黑色，并有恶臭；③脓液直接涂片镜检可见到细菌，而常规需氧培养则无细菌生长；④长期使用氨基糖苷类抗生素如链霉素、卡那霉素、新霉素、庆大霉素等治疗无效 。
二、脆弱拟杆菌为什么给人留下“脆弱”的印象？
脆弱拟杆菌真的不脆弱，其实很坚强！过去人们认为其脆弱的原因可能有：

• 脆弱拟杆菌是厌氧菌，对标本的采集运输及实验室要求较高。①与我们普遍认为的厌氧菌必须床旁接种才可存活不同，脆弱拟杆菌生命力较为顽强，属于中度厌氧菌，研究发现其对大气暴露相对不敏感，空气暴露8小时后活菌计数只是略有下降。故，非床旁采集标本也未必培养不出脆弱拟杆菌；②不是所有的实验室都开展了厌氧培养，所以该菌在普通实验室不常见，往往镜下可以看到细菌，却培养不出来，误以为细菌脆弱，已经死亡，其实或许只是培养的条件不合适。对于开展厌氧培养的实验室来说，脆弱拟杆菌并不脆弱，厌氧菌内源性感染分离率最高的就是脆弱拟杆菌。
• 厌氧菌常合并其他细菌引起混合感染，尤其与兼性厌氧菌混合感染时，兼性厌氧菌生长旺盛，这时就需要我们检验人员有足够的细心和耐心，调动起来我们的鼻子和眼睛，通过厌氧培养基中培养物特有的臭味及可能形态，把它分离出来。最好使用拟杆菌专用培养基（如胆汁七叶苷平板），分纯时分区划线更有利于脆弱拟杆菌的分离。
• 脆弱拟杆菌的鉴定。常规生化鉴定不仅对菌的纯度要求极高，对菌量的要求也是很大的，所以菌的纯度不够、量不够大对于生化鉴定来说是个极大的挑战。对于有质谱鉴定系统的实验室就容易很多，因为质谱鉴定需要的菌量少，往往1～2个纯菌落就可以，这也让我们对脆弱拟杆菌的鉴定变得更容易。
  

描述了这么多，发现脆弱拟杆菌并不脆弱！那么它的名字是何意？原来，脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)中的 “fragilis”，为拉丁语阳性形容词，英文词意为“easily broken，brittle，fragile”表示“易碎的，脆弱的”，与该菌在一定培养条件下形成脆性菌落有关，故，翻译为“脆弱拟杆菌”。名字与它生命的脆弱并无关系。
总之，脆弱拟杆菌没有想象中那么脆弱，不要被名字误导了。加强对它的认识，增强实验室对其培养、分离和鉴定能力，我们会发现，脆弱拟杆菌并不脆弱，容易被发现，容易被培养。
致谢：非常感谢屈平华老师对本文的指导！
参考文献：[1]周庭银编著；倪语星，苏建荣主审,临床微生物学诊断与图解 第3版,上海科学技术出版社,2012.05,第306页[2] 王辉等，临床微生物学手册（Manual of Clinical Microbiology,12th）.[3] Loesche WJ. Oxygen sensitivity of various anaerobic bacteria[J]. Appl Microbiol, 1969,18(5): 723-7.相关阅读
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图文：王小虾

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