3. 免疫化学发光法(1)化学发光法区别在于标记抗原、抗体,最终定量检测反应信号所涉及的方法不同。(2)免疫化学发光法从第1代至第4代标记物发展如下:第一代CLIA,采用异鲁米诺发光标记物;第二代CLEIA,采用辣根酶标记鲁米诺标记物;第三代CLIA,采用吖啶酯标记物和碱性磷酸酶标记物;第四代ECLIA,采用三联吡啶钌标记物和三丙胺。(3)鲁米诺类的发光反应须有催化剂,且与蛋白质或肽结合后其发光作用减弱,因此鲁米诺类在CLEIA中是很好的底物,但较少用于CLIA的标记。(4)辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)均有其发光底物;吖啶酯类氧化反应不需催化剂,但需要在碱性环境中进行;标记物为电化学发光反应的底物三联吡啶钌可以再循环利用,敏感度高、线性范围更宽。 4. 即时检测(1)即时检测定义即时检测(point of care test,POCT)又称为床旁检测、近患检测、现场快速检测等,POCT指在患者附近或其所在地进行的,其结果可能导致患者的处置发生改变的检测,具有快速、便携、操作简单等优势。但其在应用时缺乏完善的质量管理体系,且产品质量和技术要求也不统一,检测结果容易出现室内精密度变异系数偏大,在医学决定浓度的精密度无法正确指导临床决策。 (2)抗体影响POCT检测结果抗体必须特异性好、亲和性高、纯度达到98%以上且浓度适宜。PCT检测系统不能满足抗体的这些特点。PCT是以勃拉姆斯为标准,只有赛默飞世尔科技公司(胶体金)是以这个标准检测,但赛默飞未在中国上市。我国目前使用PCT都不能溯源到勃拉姆斯系统。 (3)即时检测与非即时检测的优劣势比较即时检测与非即时检测的优劣势比较,见表3。