医院消毒灭菌效果监测

jtzhh

  在院感科工作多年，对一些监测方面的问题一直有困惑，虽曾请教过老师，但仍未能解惑：

1、消毒内镜监测：《内镜清洗消毒技术操作规范（2004年版）》与《医院消毒卫生标准》采样液分别是10ml与50ml，
     结果判断分别是：（1）菌落数/镜=2个平皿菌落数平均值×20；
                                 （2）菌落总数（CFU/件）=m(CFU/平板）×50。请教：应按那个做？20和50是什么意思？稀释倍数吗?
2、消毒液染菌量监测：
     （1）中和剂醇类用普通营养肉汤，其他的消毒液中和剂有人说需用营养肉汤做基本液，可以吗？
     （2）结果计算：消毒液染菌量（CFU/ml）=平均每皿菌落数X10X稀释倍数，其中的10是什么意思？
      按此公式计算，皮肤消毒液监测的平板中是不允许有菌落数的，那不成了无菌液了吗？而在《皮肤消毒剂卫生要求》中，菌落总数测定结果报告也不同，望能得到各位老师指教。谢谢！

星火

与微生物老师沟通

谷子

您所说的内镜监测20和50应该是一个系数，消毒内镜的监测标准我们参照最新的《医院消毒卫生标准》；各种消毒剂的中和剂在《实用医院感染监测方法学》里都注明了，其他的问题已经请了检验的老师来回复，我们一起期待！

乔-乔

20014版内镜清洗消毒技术操作规范 消毒后内镜消毒效果监测方法是这样描述的：

（一） 采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测。

（二）菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml， 加入2只直径90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45℃-48℃营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35℃培养48小时后计数。

结果判断：菌落数/镜=2个平皿菌落数平均值×20。

20是什么意思哪?是换算系数，ta的由来这样的：取0.5ml倾倒平板，要换算成10ml中的细菌数，就应该是10=0.5×20 。

2012版医院消毒卫生标准，消毒后内镜消毒效果监测方法是这样描述的：

消毒后内镜  ：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50ml含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0 mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15 mL—20 mL，36℃±1℃恒温箱培养48 h，计数菌落数(CFU/件)。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜(0. 45 FLm)过滤浓缩，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），置36℃±1℃温箱培养48 h，计数菌落数。

菌落总数（CFU/件）=m(CFU/平板）×50

m是两平行平板的平均菌落数。

50是什么意思哪?仍然是换算系数，ta的由来这样的：取1.0ml倾倒平板，要换算成50ml中的细菌数，就应该是50=1.0×50 。

我的解释您清楚了吗？

乔-乔

关于消毒液染菌量监测
2012版医院消毒卫生标准，是这样描述的：
用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加入9 mL中和剂中混匀。醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%;也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。

用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0 mL接种平皿，将冷至40℃---45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml-20ml，36℃±1℃恒温箱接养72 h，计数菌落数；必要时分离致病性微生物。

消毒液染菌量（CFU/ml）=平均每皿菌落数×10×稀释倍数

回答您的问题1：中和剂醇类用普通营养肉汤，其他的消毒液根据消毒液的种类不同加入相应的中和剂，您的说法可以被肯定。
回答您的问题2：关于计算公式10是如何得来的？方法中是取1.0ml消毒液，加入9.0ml中和剂，稀释了10倍，接种平板时是取了稀释了10倍的加有中和剂的消毒液1.0ml，就相当于取了消毒液原液0.1ml，所以每ml消毒液中的染菌量时要×10，换算成1ml的量。

春语

     乔-乔 老师解释得清晰明了，路过学习了，谢谢！

jtzhh

乔-乔 发表于 2015-9-19 11:31
关于消毒液染菌量监测
2012版医院消毒卫生标准，是这样描述的：
用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL被检 ...

    谢谢乔乔老师的解释，明白了大概。但仍有一个最大的问题是如果这样计算的话，平皿上只要有一个菌落，消毒内镜细菌总数＜20CFU/件的合格标准及使用中皮肤粘膜消毒液染菌量≤10CFU/mL的合格标准就达不到了！继续求解。谢谢！

谷子

jtzhh 发表于 2015-9-21 16:25
谢谢乔乔老师的解释，明白了大概。但仍有一个最大的问题是如果这样计算的话，平皿上只要有一个菌落， ...

老师您好，针对您这个问题，特意请教了胡国庆教授，他的回答是，消毒卫生标准中消毒内镜的检测不仅是取1.0ml平皿接种，其他49ml滤膜过滤后进行培养，当滤膜不可计数时按平皿公式，当滤膜法可以计数时按滤膜的计算公式算； 此外，皮肤粘膜消毒剂，如果平皿上长了1个细菌，乘以系数，也正好是等于10CFU，未超标；

个人理解，如果说消毒内镜取1ML的平皿上都有细菌的话，那就应该是超标，因为49ML滤膜的细菌捕获力较1ML要强。你认为呢？

jtzhh

谷子 发表于 2015-9-28 17:42
老师您好，针对您这个问题，特意请教了胡国庆教授，他的回答是，消毒卫生标准中消毒内镜的检测不仅是取 ...

谢谢版主的认真解答，增长知识了！

杨柳依依

谢谢 乔-乔 老师解释，长知识了！赶紧与细菌室人员沟通，不知我们的报告算对否