肠道门诊疑似霍乱患者标本的检验程序

马车

乱诊断
（GB 15984—1995）
病原学诊断
A1 标本的收集
标本以病人粪便为主，水样便采取1～3mL，成形便采取指甲大小的粪量，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处采取。
A2 标本的送检
采得的标本应立即接种于培养基。不能立即检查的，要放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基中。标本与保存液比例约为1∶5。
A3 分离培养
A3.1 直接分离培养：急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种在选择性培养基上。目前常用的强选择性培养基有庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等。
A3.2 增菌后分离培养：所有粪便标本都应接种碱性蛋白胨水培养基，放37℃增菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强选择性琼脂平皿。
A3.3 鉴定：自分离培养基上挑取可疑菌落与01群霍乱弧菌多价诊断血清及0139群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集试验。玻片凝集用血清的效价一般应为1∶40～1∶50。如可疑菌落在血清中很快(一般在10s内)出现肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。可疑菌落较多时，应挑选5个以上的菌落逐个进行玻片凝集检查，必要时，取原划线菌落边缘透明部分再做玻片凝集，均为阴性时方可报告未检出01群及0139群霍乱弧菌。对首发病例菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查。
血清学诊断
B1 血清学检查有助于流行病学追溯诊断，检查抗体的成分为抗菌抗体。为进行血清学诊断，需要采取病人的双份血清，在发病第1～3天采第一份血清，第15～20天采第二份血清。检查血清中抗菌抗体常用凝集试验和杀弧菌试验，杀弧菌试验比凝集试验敏感。
B2 试管凝集试验：用生理盐水对倍连续稀释待检血清，每管含稀释血清0.5mL。将标准菌在营养琼脂上的16～18h培养物用0.2％福尔马林生理盐水制成约含18亿菌/mL(相当于细菌标准比浊管浓度)的悬液，每稀释血清管加0.5mL；另将菌悬液加入0.5mL生理盐水中作对照。摇匀，置37C3h观察初步结果，再放冰箱(4℃)或室温过夜，观察最后结果。生理盐水对照不出现自然凝集，能使菌凝于管底成伞状，上清半透明者判为＋＋，以能使菌呈＋＋凝集的血清最高稀释度判为血清凝集效价。第二份血清效价比第一份血清增长4倍或以上者有诊断意义。
01群霍乱弧菌的鉴定和分型
C1 血清分型
用普通琼脂或碱性琼脂培养基上的菌苔进行血清分型。分型使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应。
C1.1 在小川型单价血清凝集，在稻叶型单价血清不凝集者为小川型。
C1.2 在小川型单价血清不凝集，在稻叶型单价血清凝集者为稻叶型。
C1.3 在小川型、稻叶型单价血清均呈明显凝集者为彦岛型。
C2 试管凝集试验
用生理盐水自1∶20开始对倍连续稀释01群霍乱多价血清，每管含稀释血清0.5mL。将被检菌在营养琼脂的16～18h培养物用0.2％福尔马林生理盐水制成每毫升约含18亿菌体(相当于细菌标准比浊管浓度)的悬液，每稀释血清管加入0.5mL；另将菌悬液0.5mL加入0.5mL生理盐水中作对照。摇匀，置37℃3h观察初步结果。再放4℃或室温过夜，观察最后结果。生理盐水对照不出现自然凝集，能使试验菌出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为凝集滴度，凝集滴度达到或超过血清原效价一半的即可确定为01群霍乱弧菌。
对一次流行的首批病例菌株和玻片凝集反应不典型的菌株应做本试验。

巴斯德之徒

到霍乱弧菌的标准化检验程序,不得不提一下的是,现在有一种对于霍乱弧菌有一种免疫印迹的胶体金试纸,是采用抗体捕获的原理检测粪便中霍乱弧菌的可溶性抗原的.比较快速,但并没有被国家标准委批准,仅仅作为"研究"使用,可在我们这儿已经被广泛用于筛选了.
    据我在市级以上CDC的了解,他们也并不支持这种筛选方法,这种试剂他们是作过对照性研究的,总体期望值过低,不能用作临床标准化检测,否则很危险.
   mache 朋友提供的标准化操作方案仍然是现在的金标准方法,不能想当然的更改啊!这可不是仅仅学术作风问题,而是牵涉传染病防治法的问题,牵涉到千千万万条人命的大问题.