正确选择并规范应用环境消毒技术的重要性（二）
有研究采用市售消毒剂，如乙醇或氯胺T（chloramine T）在sub-MICs条件下培养，观察金葡菌形成生物膜的能力（强：B+++，中B++，弱B+），并采用Syto9绿色荧光核酸染色进行定量分析。证实1.25%～2.5%的乙醇和2500 µg/mL氯胺T具有明显促进金葡菌生物膜形成的作用。 金葡菌作为常见的病原体，常因清洁与消毒不彻底而在环境表面形成生物膜，从而使其在环境表面存活下来。与细菌浮游状态相比，处于生物膜内的细菌对于消毒剂、抗生素和细胞吞噬作用更具有耐受性。而sub-MICs的消毒剂为细菌适应和生长提供了机会。 该研究采用Syto9生物膜定量检测，经Syto9绿色荧光核酸染色定量培养48h，Syto9被动扩散通过细胞膜并结合到DNA上。由于DNA也是细胞外基质的重要组成部分，这种染料会对细胞内的DNA如同细胞外的DNA一样进行染色，从而提供有关总生物量的信息，包括活的或死亡的细胞。 乙醇浓度在0.63～5%（v/v）时分离到高强度生物膜形成B+++，各浓度组几乎同样促进生物膜形成。与对照组相比，处理样本的生物膜形成增加明显。B++分离率在所有乙醇的浓度组中几乎是一样的。B+分离率则随着乙醇浓度的增加（从0.63%至1.25%）而升高，在1.25%达到最高点（见图4）。但当浓度进一步提高到5%以上生物膜形成逐渐减少。 经过氯胺T处理后，具有统计学意义的生物膜形成B+++，发生在1250 µg/mL和2500 µg/mL。当浓度在5000 µg/mL时，没有发生生物膜的形成。中度生物膜B++则随着氯胺T浓度的逐渐提高而增加，最大形成发生在2500 µg/mL（见图4）；当浓度达到5000 µg/mL时生物膜形成明显减少。
图4. 金黄色葡萄球菌菌株经乙醇（A）和氯胺T（B）sub-MICs浓度处理后，生物膜形成能力（强：B+++，中：B++，弱B+）。对照组未经任何消毒剂处理。
表面蛋白的酶法提取技术显示，Syto9标签测量生物膜形成的最大值，分别发生在1.25%乙醇和2500µg/mL氯胺T的浓度组。 图4-A显示，经乙醇sub-MICs浓度处理后，强生物膜B+++形成水平甚至高出对照组3倍以上，中B++形成水平也高出对照组2倍左右。同样，B显示经氨氯T sub-MICs浓度处理，各浓度组均有不同水平的上升，尤其是2500 µg/mL浓度组，B+++、B++和B+ 3个组的水平均有2倍～3倍的提升。 综上所述，规范使用环境消毒技术，严格消毒溶液的有效浓度，对于有效清除环境表面的病原微生物有着重要作用，同时，对于预防细菌在环境表面形成生物膜更具有重要意义。 参考文献 1. Hu H,Johani K,Gosbell I B et al. Intensive care unit environmental surfaces are contaminated by multidrug-resistant bacteria in biofilms: combined results of conventional culture, pyrosequencing, scanning electron microscopy, and confocal laser microscopy[J] .J. Hosp. Infect., 2015, 91: 35-44. 2. Cincarova L,Polansky O,Babak V et al. Changes in the Expression of Biofilm-Associated Surface Proteins in Food-Environmental Isolates Subjected to Sublethal Concentrations of Disinfectants[J].Biomed Res Int, 2016, 2016: 4034517. 3. de Melo CD,Johani K,Melo DS, et al. Biofilm contamination of high-touched surfaces in intensive care units: epidemiology and potential impacts[J].Lett. Appl. Microbiol., 2019, doi:10.1111/lam.13127 |
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