为什么通常不采用分子技术直接检测血液中的菌原菌

乔-乔

众所周知，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是1985年Kary Mullis发明的新技术，1993年获诺贝尔化学奖。该技术一种用于放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它的最大特点就是能将微量DNA大幅增加。

近年来，随着实时PCR、多重PCR的发展和与其他分子生物技术的融合，以及相关仪器设备在分析速度和自动化程度方面取得显著进步，PCR技术越来广泛地应用于临床微生物学诊断。然而，不知道大家注意到没有，PCR技术及相关的分子检测技术主要用于病毒检测，包括各种组织和体液中的病毒，如HBV、HCV、HIV、EB病毒、I/II型单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒等。PCR技术也有用于细菌检测，但主要用于有菌部位，如生殖道特沙眼衣原体和淋球菌筛查，呼吸道标本中的特殊病原体（百日咳鲍特菌、军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体）检测等（表1和表2），而很少提到血液标本，尤其是血流感染时病原菌的直接检测。

表1、美国FDA批准的一些分子诊断方法

实验	方法	公司
沙眼衣原体检测	PCR	Roche
	连接酶链反应	Abbot
	转录介导的扩增	Gen-Probe
	杂交捕获法	Digene
淋球菌检测	连接酶链反应	Abbot
	杂交捕获法	Digene
沙眼衣原体和淋球菌筛查	杂交法	Gen-Probe
	链替代扩增反应	Becton-Dickimson
结核分枝杆菌检测	PCR	Roche
	转录介导的扩增	Gen-Probe
人乳头瘤病毒筛查	杂交捕获法	Digene
巨细胞病毒检测	杂交捕获法	Digene
	核酸序列依赖扩增	Organon/Teknika
A群链球菌检测	杂交法	Gen-Probe
HIV定量检测	PCR	Roche
阴道加特纳菌、阴道毛滴虫和念珠菌检测	杂交法	Gen-Probe

表2、一些重要细菌、病毒的核酸检测

微生物	标本类型	临床诊断
EB病毒	脑脊液	EB病毒淋巴组织增生紊乱
I、II型单纯疱疹病毒	脑脊液、人玻璃体	脑炎
水痘-带状疱疹病毒	多种组织	水痘
多瘤病毒	脑脊液	进行性多病灶脑白质病
肠道病毒	脑脊液	病毒性脑膜炎
小病毒B19	羊水	胎儿水肿
	血清	贫血
腺病毒	膀胱、组织、血液	免疫抑制病人，器官移植病人
埃里希体	血液	人埃里希体病
百日咳鲍特菌	鼻咽	百日咳
军团菌	呼吸系统	肺炎
肺炎衣原体	呼吸系统	肺炎
肺炎支原体	呼吸系统	肺炎
幽门螺杆菌	胃液、粪便	胃溃疡

  那么，为什么不直接采用PCR及相关的分子生物学技术用于血液标本，尤其是血流感染和脓毒血症病原菌的直接检测呢，其主要原因包括：1）血流感染时血液中的细菌含量低，在20~100个/ml 之间（甚至更低），从而导致常规方法提取的细菌DNA浓度低而无法达到PCR所需要的浓度；2）人体细胞DNA浓度高，非有效去除时，可能会对常规的细菌DNA提取方法存在干扰。3）分子方法成本高，且存在假阴性风除；而血培养成本低，阳性率远高于非培养的分子方法，且可以提供药敏实验结果。

林静

谢谢老师分享，学习了

感控雏鹰

长知识了，之前只知道说含量比较低不好提取，在就是估计费用不便宜不好推广，第二条还是第一次知道

ynosmile

路过学习，谢谢分享给大家！

陈雷123

学习了，长知识了，谢谢老师分享！！！！！

lyluoxiuhua

路过这里学习了老师的资料分享！

bbnn1104

学习了，感谢老师的分享！

lllecho

学习了，长知识了，谢谢老师分享！那二代测序检测呢？

yanghongmei

涨姿势了，感谢老师的分享！

小雨飞飞

长知识了，第一次见到对细菌监测这么详细的讲解，虽然广泛使用不太现实，但相信科学研究人员一直在为此方面努力

妖兵荒

谢谢老师分享，学习了

lingli

学习了，长知识了，谢谢老师分享

jcyyhlb

学习了，谢谢老师的分享！

快乐玉儿

路过学习，谢谢老师的分享。

青青叶

受教了，谢谢老师的分享

hjqf

学习了，涨知识了，谢谢老师分享！

小云朵

下载学习，感谢老师的分享！