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试剂和培养基
B.1 0.03mol/L磷酸盐缓冲液(0.03mol/L PBS) 称取磷酸氢二钠2.84g，磷酸二氢钾1.36g，加入到1000mL蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸汽灭菌20min。
B.2 洗脱液 称取蛋白胨10.00g，氯化钠8.50g，吐温-80 1.0mL，加入到1000mL 0.03mol/L磷酸盐缓冲液液中，加热溶解后调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸汽灭菌20min。
B.3 生理盐水 称取氯化钠8.50g，溶解于1000mL蒸馏水中，于121℃压力蒸汽灭菌20min。
B.4 革兰染色液及染色方法
B.4.1 结晶紫染色液:称取结晶紫1.00g，溶解于20mL 95%酒精中，然后与80mL 1%草酸铵水溶液混合。
B.4.2 革兰碘液:称取碘1.00g，碘化钾2.00g，混合后加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL，混匀。
B.4.3 沙黄复染液:称取沙黄0.25g，溶解于10mL 95%酒精溶液中, 然后加入90mL蒸馏水，混匀。
B.4.4 染色法：
a) 将涂片在火焰上固定。
b) 滴加结晶紫染色液，作用1min，水洗。
c) 滴加革兰碘液，作用1min，水洗。
d) 酒精脱色30秒钟；或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，脱色10秒种。
e) 水洗，滴沙黄复染液，作用1min，水洗。
f) 待干镜检。
B.5 人(兔)血浆
取灭菌3.8%柠檬酸钠1份，加人(兔)全血4份， 混匀静置，3000r/min 离心5min，取上清，弃血球。
B.6 普通营养琼脂培养基
B.6.1 成分：蛋白胨 10g、牛肉膏 5g、氯化钠 5g、琼脂 15g、蒸馏水 1000mL。
B.6.2 制作方法：除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装
于 121℃压力蒸汽灭菌20min。
B.7 血琼脂培养基
B.7.1 成分： 营养琼脂 100 mL、脱纤维羊血(或兔血) 10 mL。
B.7.2 制作方法：将营养琼脂加热熔化待冷至50℃左右，以无菌操作将10mL脱纤维血加入后摇匀，倾注平皿，置冰箱备用。
B.8 需-厌氧菌培养基
B.8.1 成分：酪胨(胰酶水解) 15g、牛肉膏 3g、葡萄糖 5g、氯化钠 2.5g、L-胱氨酸 0.5g、硫乙醇酸钠 0.5g、酵母浸出粉 5g、新鲜配制的0.1%刃天青溶液1.0mL或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5mL、琼脂0.5g -0.7g、蒸馏水 1000mL。
B.8.2 制作方法：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入蒸馏水中，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH至6.9～7.3，分装后115℃压力蒸汽灭菌30min。
B.9 SCDLP液体培养基
B.9.1 成分：酪蛋白胨 17g、大豆蛋白胨 3g、葡萄糖 2.5g、氯化钠 5g、磷酸氢二钾 2.5g、卵磷脂1g、吐温80 7g、蒸馏水 1000mL。
B.9.2 制作方法：将各种成分混合(如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加热溶解后，调pH至7.2～7.3，分装于121℃压力蒸汽灭菌20min，摇匀，冷至25℃使用。
B.10 伊红美蓝培养基
B.10.1 成分：蛋白胨 10g、乳糖 10g、磷酸二氢钾 2g、2%伊红溶液 2mL、0.65%美蓝溶液 1mL、琼脂 17g、蒸馏水 1000mL。
B.10.2 制作方法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH至7.1，分装后121℃压力蒸汽灭菌
20min。临用时，以无菌操作加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50℃时，加入伊红和美蓝溶液摇匀，倾注平皿，置４℃冰箱备用。
B.11 0.5% 葡萄糖肉汤培养基
B.11.1 成分： 胨 10g、氯化钠 5g、葡萄糖 5g、肉浸液 1000mL。
B.11.2 制作方法：取胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调pH至7.0～7.4，分装，于115℃压力蒸汽灭菌30min。
B.12 甘露醇培养基
B.12.1 成分： 蛋白胨 10g、牛肉膏 5g、氯化钠 5g、甘露醇 10g、0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL、蒸馏水 1000mL。
B.12.2 将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加入蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚蓝混匀后，分装，于115℃压力蒸汽灭菌20min。
B.13 乳糖胆盐发酵管
B.13.1 成分：蛋白胨 20g、猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL、蒸馏水 1000mL。
B.13.2 制作方法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分装(每管10mL)，并放入一个发酵管，于115℃压力蒸汽灭菌15min。
B.14 乳糖发酵管
B.14.1 成分： 蛋白胨 20g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL、蒸馏水 1000mL。
B.14.2 制作方法：将蛋白胨及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分装(每管10mL)，并放入一个发酵管，于115℃压力蒸汽灭菌15min。
B.15 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基
B.15.1 成分：蛋白胨 10g、葡萄糖 5g、2%溴甲酚紫酒精溶液 0.6mL、蒸馏水 1000mL。
B.15.2 制作方法：将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH 至7.0～7.2，加入2%溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装(每管 5mL)，并放入一个发酵管，于115℃压力蒸汽灭菌30min。置4℃冰箱备用。
B.16 绿脓菌素测定用培养基
B.16.1 胨 20g、氯化镁（无水） 1.4g、硫酸钾 10g、甘油 10mL、琼脂 18 g～20g、蒸馏水 1000mL。
B.16.2 制作方法：取胨、氯化镁、硫酸钾加入水中，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2～7.4，分装于小试管，灭菌。
B.17 明胶培养基
B.17.1 胨 5g、明胶 120g、牛肉浸出粉 3g、蒸馏水 1000mL。
B.17.2 取上述各成分加入水中，浸泡约20min，随时搅拌，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2～7. 4，分装于小试管，灭菌。
B.18 注意事项
B.18.1 双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分为乳糖胆盐发酵管的2倍；3倍浓缩乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分为乳糖胆盐发酵管的３倍
B.18.2 培养基用的试管口和三角烧瓶口应用棉塞或硅胶制成的塞子，再用牛皮纸包好。
B.18.3 试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过1个月。培养基推荐4℃冷藏保存。 |
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发表于 2018-8-27 13:23
