马车 发表于 2012-2-6 14:13

透析液和透析水细菌监测应该使用哪种培养基?

如题.一些现行的规范中没有指明培养所需的培养基成分和种类.部分研究资料表明培养基成分对监测结果影响很大.到底应该使用哪种呢?

yingchun 发表于 2012-2-6 15:13

本帖最后由 手榴弹 于 2012-2-6 15:32 编辑

首先了解透析中微生物污染状况:
1.污染水环境以微生物为主(非致病性)
2.主要是耗氧型G-水生杆菌
3.G-水生杆菌产生内毒素导致长期透析患者营养不良及免疫力受损害,慢性炎症反应.
4.也经常会发现非结核分枝杆菌几真菌的污染.
的确没有规范明确使用何种培养基,但是从以上透析中微生物可能污染状况可知,大部分污染微生物是低营养需求除非结核分枝杆菌外,故个人建议:
1.常规使用普通营养琼脂平板.
2.必要时加选特殊培养基.

yingchun 发表于 2012-2-6 15:28

不好意思,修正错字,是低营养需要.

蓝雪0816 发表于 2012-2-6 15:43

“用常规体液培养的富营养培养基去培养透析用水是行不通的,因为水生菌只适合在乏营养培养基中生长,水生菌在富营养培养基中生长缓慢,甚至不能成活。”(中国血液净化2011年10卷11期581页,《正确选择透析液细菌培养方法和余氯检测方法》,北京大学第一医院),所以,普通营养琼脂培养基培养微生物指标不超标,不代表真的不超标。文中推荐选用胰蛋白酶大豆琼脂培养基(TSA)或胰蛋白胨葡萄糖浸膏琼脂培养基(TGEA)或Reasoner,s 2A培养基(R2A)进行透析用水和透析液细菌培养。
更详细信息请查询原文。

yanghongcai 发表于 2012-2-6 17:03

如果监测透析液或者透析用水中的细菌总数,用普通营养琼脂培养基就可以了。这种培养基有成品,使用起来很方便。

茉莉花开 发表于 2012-2-6 17:13

cyfyzlg 发表于 2012-2-6 15:43 static/image/common/back.gif
“用常规体液培养的富营养培养基去培养透析用水是行不通的,因为水生菌只适合在乏营养培养基中生长,水生菌 ...

您所说的培养基有成品出售吗?

石磊--wxmsl 发表于 2012-2-6 17:15

茉莉花开 发表于 2012-2-6 17:13 static/image/common/back.gif
您所说的培养基有成品出售吗?

有的,有需要我可以帮你询问。

茉莉花开 发表于 2012-2-6 17:22

wxmsl 发表于 2012-2-6 17:15 static/image/common/back.gif
有的,有需要我可以帮你询问。

好!请您帮忙咨询,并把信息告诉我!

石磊--wxmsl 发表于 2012-2-6 18:13

茉莉花开 发表于 2012-2-6 17:22 static/image/common/back.gif
好!请您帮忙咨询,并把信息告诉我!

性    状
原    理: 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。


用    途
用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养,也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003中4.7,GB/T4789.2-2003,GB15979-2002和GB15981-1995)。

使用方法:

1、      称取本品33g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,备用。
2、      (食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠),充分振摇,即为1:10的均匀稀释液。依次做1:100,1:1000……稀释液。
3、      根据对样品污染情况的估计,选择2—3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。
4、      稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后,倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、      观察结果。
6、      菌落计数方法:
做平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在计下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、      菌落计数的报告:                                                
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长 时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2 以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如有不同来源的几条链,则应将每条链视为一个菌落 计
A:稀释度的选择:
应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见质量标准中附表菌落数的报告)。
若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字(见质量标准中附表菌落数的报告中例2及3)。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见质量标准中附表菌落数的报告中例4)。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见质量标准中附表菌落数的报告中例5)。
若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见质量标准中附表菌落数的报告中例6)。
若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见质量标准中附表菌落数的报告中例7)。
明天白天帮你询盘问价格。

马车 发表于 2012-2-7 14:11

这其实是个很严重的问题,不知道大家是否在使用合适的培养基以及培养的条件是否合适.我记得曾经提议有关自来水以及放置几天后的自来水的细菌培养试验的问题,多数做过试验的老师几乎都培养结果为阴性.所以我们如果只知道进行采样监测,但是监测的用材以及监测的条件有问题,我们的监测还有何意义?透析水的监测确实多数都在使用普通营养琼脂,对结果的影响但不一定知道.

蓝雪0816 发表于 2012-2-9 08:53

茉莉花开 发表于 2012-2-6 17:13 static/image/common/back.gif
您所说的培养基有成品出售吗?

这种培养基,论文中有资料。

马车 发表于 2012-2-9 11:57

YY0572-2005标准全文:
《血液透析和相关治疗用水》

前言
本标准的全部技术内容为强制性。
本标准修改采用国际标准ISO 13959:2002《血液透析和相关治疗用水》。
本标准与国际标准的修改在于:
¬¬----国际标准中3.1条验证和监测经处理的水,因无具体的测试方法,只是一个原则上的规定,故将此条单列出来,作为总则.
----国际标准中3.2条微生物要求是包含了细菌总数和细菌内毒素两个指标,故本标准将之分成了两个条款.且将其不明确的地方(或不得低于国家法规和同类法规的要求)删除.
----国际标准中4.1中对细菌总数提出了多种确定方法和不建议使用的方法,本标准明确采用了国内常用的倾注平板法为仲裁方法,也可采用膜过滤法.
----国际标准中4.2所列举的各元素的检验方法有很多,本标准对此明确了仲裁方法.并对一些明显是精确度较低的,但比较经济的测试方法,增加了精确度较高的测试方法,如砷、硫酸盐等。
本标准由国家食品药品监督管理局提出。
本标准由全国医用体外循环设备标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:广东省医疗器械质量监督检验所。
本标准主要起草人:颜林、李伟松、张扬、莫富诚。

引言
要想保证血液透析或血液透析滤过既安全又有效,极其重要的一个方面,就要是保证水质优良。
血液透析和血液透析滤过,患者通过血液透析器或血液透析滤过器的半透膜,每周可能要接触超过300L的水。而一个健康的人,每周摄入的水很少超过12L。与水接触的量增加近30倍,因此,应控制和监测水质,以避免已知的或估计有害的物质过量。制备透析液的用水通常都有要经过一定的处理,使水质达到规定的要求。这类水处理系统可包括各种设备:水质软化器、反渗透装置、去离子装置、高效过滤器、微型过滤器、活性炭过滤器、紫外线消毒器和水箱。水处理系统的这些设备性能如何,取决于原水的水质和整个系统的功能,看它能否制备出并持续生产出合格的处理水。
微量元素和微生物源污染长期存在着潜在的危害,现在对此了解正越来越多,处理饮用水的技术已获得持续发展,为此,本标准亦将相应的向前发展,并日臻完善。
本标准包含了对制备透析液用水在化学方面和微生物学方面的最低要求,及为保证符合要求而应实行的各项步骤。其中,包括了对原水的基本判定准则。
处理水中因存在有机污染物而产生生理效应,这是一个值得研究的重要领域。考虑本标准发布时若规定低于各管理机构公布的阈值,并不恰当。但本标准的用户应当意识到,若存在有机物污染,就可能出现问题。监测有机物污染的总浓度,可通过测量有机炭总量(TOC)进行。TOC并不表征某种特定污染物的浓度。对于原水,已知有机物污染浓度高的地方,可考虑进行特定的水处理。
   用浓缩物配制最终的透析液,应按ISO 13958 的规定进行生产、包装和贴标签。用于混和的大量用水,要符合本标准。血液透析机构负责管理水处理设备、血液透析系统和浓缩物。
   由于最终混合制成的透析液不受生产者控制,故本标准不对其临床技术上必要的处理作出规定。血液透析职业人员负责选择各种不同的应用(血液透析、血液透析滤过、血液滤过),并要了解各种处理的风险及在每种治疗中采用透析液的安全要求。
   若处理水用于血液透析器再处理(清洁,测试及与消毒剂混合),用户应保证处理水符合本标准要求。应在重复使用设备的进水口测定处理水。
   本标准对水处理系统生产者、血液透析机构具有指导作用。
1.范围
本标准规定了血液透析和血液透析滤过中制备浓缩透析液和透析液所用水的最低要求。
本标准不涉及水处理设备的操作,亦不涉及由处理水与浓缩物混合最后制成供治疗用的透析液。负责操作的只能是专业透析人员。
2. 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准:
2.1
透析液dialyzing fluid,dialysis fluid,dialysate
血液透析或血液透析滤过时,拟与血液交换溶质的液体.
注:这不包括血液透析滤过中所用预包装的母液.
2.2
原水 feed water
供给水处理系统的水.
2.3
   处理水 Product water
   完全通过了水处理系统处理、进入血液透析设备的水。
3        验证和监测处理水
为了设计出一种合适的水处理系统,以便符合进行体外循环治疗病人的需要,应测定原水的水质及其变化。应定期监测原水的水质,并保证持续进行恰当的水处理。按下面规定,处理水的水质应在安装水处理装置时验证,应定期监测处理水的水质。生产者应在原水和处理水的监测方式和频度两方面向用户提供说明书,并对方法选择、监测频度及偏离要求的纠正措施进行指导。
4        要求
4.1        微生物学要求
4.1.1        处理水所含细菌总数,应不得超过100CFU/mL.
4.1.2        在水处理装置的输出端的细菌内毒素,应不得超过IEU/mL;在血液透析装置入口的输送点上的细菌内毒素,应不得超过5EU/mL.
4.2        化学污染物
处理水所含化学污染物,应不得超过表1的规定.

表1 处理水所含化学污染物最大容允量
污染物        最大允许量/(mg/L)        污染物        最大允许量/(mg/L)
铝        0.01        镁        4(0.16mmol/L)
砷        0.005        汞        0.0002
钡        0.1        硝酸盐(氮)        2
镉        0.001        钾        8(0.2mmol/L)
钙        2(0.05mmol/L)        硒        0.09
氯胺        0.1        银        0.005
氯        0.5        钠        70(2.8mmol/L)
铬        0.014        硫酸盐        100
铜        0.1        锡        0.1
氟化物        0.2        锌        0.1
铅        0.005        -        -
5        试验方法
5.1        微生物试验
应在按比例配制透析液装置的入口处或在混合罐的入口处,收集处理水的试样.
5.1.1试样应在收集后30 min内进行化验,或立即放在1℃~5℃下储存,并按常规程序在收集后24 h内化验。应采用常规的微生物检验方法(倾注平板法)获得细菌总数计数(标准培养皿计数).培养基应为胰蛋白酶大豆琼脂或等价物.计算菌落数目应在35℃~37℃下培养48 h后进行.48 h后若呈阴性,可于72 h后再检查.这是标准的操作方法.
       也可用另一种方法测定水生微生物,即采用膜过滤技术滤除500mL~1000mL水,并在像R2A这样的低营养琼脂培养基上,可在28℃~32℃下培养5d或更长时间.
5.1.2        应用鲎试剂法检查内毒素,测定是否有致热原.
5.2        化学污染物试验
对处理水进行化学分析,检查其所含表1列举的污染物量,应采用基准化学分析方法,要保证测定精确,应采用合适的容器,并调节PH值.表2列出检验每种污染物的方法.其他检验方法若被证明具有同样的精确性及再现性,亦可以采用.
注:为了检验化学污染物,可能需要在取样点收集足够的样本.取样点的选择,要根据水处理系统及其整个管道的状况决定.

茉莉花开 发表于 2012-2-9 19:51

mache 发表于 2012-2-7 14:11 static/image/common/back.gif
这其实是个很严重的问题,不知道大家是否在使用合适的培养基以及培养的条件是否合适.我记得曾经提议有关自来 ...

连续两天,我做过两次水质的监测,一次结果为阴性,一次菌落数超过100.
我们使用的琼脂培养基都是买的成品!我唯一想知道的就是胰蛋白酶大豆琼脂培养基(TSA)或胰蛋白胨葡萄糖浸膏琼脂培养基有没有成品出售,因为现在的化验室都不自己做培养基了,都是买的成品。如果是自己配置,相当的麻烦!

野枫 发表于 2015-2-3 09:47

透析液及透析用水培养事先做好的一次性培养基是不可以,必须先将透析液放入培养皿内,再将培养基一边倾倒一边摇匀。

野枫 发表于 2015-2-3 10:06

我用一次性的培养基从来都是阴性。

二进制 发表于 2015-2-4 05:52

野枫 发表于 2015-2-3 09:47
透析液及透析用水培养事先做好的一次性培养基是不可以,必须先将透析液放入培养皿内,再将培养基一边倾倒一 ...

此法是始祖、标准菌落计数法。今其它,只是仿生法而已。{:1_17:}
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