【感染科普笔记2023-12-21】魏莲花丨军团菌感染及实验室检测
本帖最后由 高山雪莲W 于 2024-9-27 10:18 编辑讲者丨魏莲花(甘肃省人民医院检验中心)
整理丨于莉(赤峰学院附属医院)
审核丨王玉兰
来源丨SIFIC 2023“全国感控与耐药感染”联合大会
近年来,军团菌引起的感染逐渐引起临床医务人员的重视。军团菌属于水源性致病菌,是严重社区获得性肺炎或医院获得性肺炎的最常见病原体,特别是嗜肺军团菌能够在人类中引起称为军团病的重症肺炎,对人类健康构成潜在的严重威胁。在SIFIC2023“全国感控与耐药感染”联合大会上,来自甘肃省人民医院的魏莲花教授分享的《军团菌感染及实验室检测》,通过典型案例打开认识军团菌的视角,对寻觅致病病原体的全过程,以及对军团菌的发现、科属种以及血清型、军团菌病及相关鉴定技术等内容进行了详细的讲解。
一、1例重症肺部感染患者病原菌探索过程(一)案例分享患者,女,81岁,因体检发现血常规异常,进一步检查,确诊为急性髓系白血病-M2(高危组,预后不良型);期间口服中药治疗,病情稳定,一年后出现无明显诱因发热,最高T38.4℃,咳嗽、咳痰。
肺部CT示:右中下陈旧性病变可能,伴右中叶支气管牵拉、扩张,右侧胸膜增厚钙化。右肺上叶尖段、左下肺多发小结节,考虑陈旧性病变可能性大。
至2018年4月24日(一年后),患者症状:咳嗽咳痰,粉红色脓痰,发热,38.9℃;体征:贫血貌,双肺呼吸音粗,右肺底细湿啰音;血象:WBC 36.7×109/L,N%=3.8,PCT 0.13ng/mL,CRP 70.4,血沉95mm/H,微生物学检查结果:无致病菌生长;2018.4.24-5.2 美罗培南8天,4.30-5.10泊沙康唑。
至2018年5月2日,患者症状:咳嗽咳痰加重,黄色脓痰,尖段发热好转,37.5℃;体征:贫血貌,双肺呼吸音粗,右肺底细湿啰音,血象:WBC 30×109/L,N%=3.8,PCT 0.11ng/mL;微生物学检查结果:无致病菌生长;舒普深+利奈唑胺+泊沙康唑抗感染治疗7天。
至2018年5月18日,患者症状:发热38.5℃,流涕、咳痰;体征:双肺呼吸音粗,可闻及哮鸣音;血象:WBC 46.7×109/L,N%=2.6,PCT 0.226ng/mL;微生物学检查结果:无致病菌生长;2018.5.18-5.25奥司他韦+泊沙康唑。
至2018年7月6日,患者症状:发热38.5℃,咳嗽咳痰,粉色,脓性痰;体征:贫血貌,双肺呼吸音粗,双肺可闻及广泛痰鸣音,湿啰音及喘鸣音;血象:WBC 47.1×109/L,N%=0.4,PCT 5ng/mL,CRP 282.6;微生物学检查结果:无致病菌生长。
临床初步诊断:1.重症肺炎,呼吸衰竭(Ⅰ型);2.急性髓系白血病(M2型预后不良型),粒细胞缺乏(重度);3.高血压病(药物控制后正常,极高危)。
实验室检查:血常规:WBC 47.1×109/L,Hb 86g/L,Plt 58×109/L;细菌感染二项:PCT:0.104,IL-6:170.5;生化:肝肾功能、电解质正常、DIC正常,C反应蛋白:34.1mg/L,血沉:53mm/h、真菌感染二项(G+GM)均正常,收住于血液科,后患者因重症肺炎转入ICU。微生物检查:连续多次送检深部痰培养无致病细菌、真菌生长。
(二)MDT——寻觅可能的病原菌病人有感染征象,但无病原学证据,因此组织各大医院专家会诊,微生物室专家也参与会诊,从获取的痰标本中再次寻觅病原菌过程:1.留取痰液标本,肉眼观察痰液形状呈脓性、粉红色;优先考虑是否来源于结核病?肿瘤?或其0他疾病?(1)抗酸染色阴性,GENXPERT阴性,IGRA试验阴性,排除结核病。(2)脓性痰直接涂片,革兰染色,镜下可见G-小杆菌,考虑病原菌为嗜血杆菌?巴斯德菌?其他?但血平板、巧克力平板均未生长。(3)借助实验室现有技术——呼吸道病原菌核酸检测系统(芯片法)进行呼吸道13种病原检测,结果示:嗜肺军团菌阳性。(4)军团菌Ⅰ型尿抗原检测(-),以往研究示兰州地区军团菌流行型为6型和13型。(5)免疫荧光法查军团菌抗体:(+)。(6)接种BCYEα平板,35℃培养72h。平板上可见有白色湿润、光滑菌落生长、高度疑似军团菌菌落。镜下为G-细杆菌。初步判断:BCYEα平板生长,血平板、BCYEα不含半胱氨酸平板不生长,高度疑似军团菌。(7)飞行质谱仪鉴定:嗜肺军团菌。至2018年7月7日,该患者确诊为血液病合并军团菌病,将抗菌药物调整为左氧氟沙星+泰能+利奈唑胺+泊沙康唑,体温趋于正常,肺部感染影像学逐渐好转,3月后肺部感染基本痊愈。
二、认识军团菌及军团菌病(一)军团菌的发现
[*]1967年在美国费城,参加退伍军人大会的人员爆发了一种症状相同,原因不明的细菌性肺炎,有221人感染疾病,其中死亡34人。
[*]初步的流行病学显示,致病的微生物可能通过空气传播,采集标本,分离病原体。
[*]革兰阴性杆菌——嗜肺军团菌(L.pneumophila)。
[*]军团菌病(已知的首次暴发)。
(二)军团菌特点
[*]革兰阴性杆菌,浅红色短杆菌,直径0.3~0.5um,长约1.2~1.5um或更长,菌体一端有鞭毛。
[*]在含L-半胱氨酸和焦磷酸铁的BCYE琼脂培养基上生长,通常需要在35℃5%CO2培养箱培养2~10天。
[*]生长形成的菌落一般呈白色,也可能会从紫色变为蓝色,或是灰绿色。
(三)军团菌科、属、种、血清型
[*]军团菌科(Legionellaceae)
[*]军团菌属:16s rRNA分析表明,在蛋白细菌系γ亚群中,军团菌科只有一个军团菌亚群。与引起Q热病的贝氏克斯体亲缘关系最近,二者具有同样的细胞生活方式,可以利用共同的基因感染宿主细胞。
[*]军团菌种:现已发现50个种,70多个血清型,至少有20个种可引起人感染。
(四)军团菌病主要分为肺炎型、庞蒂亚克热和无症状感染。
(五)在哪些环境中存在军团菌军团菌常寄居在冷却塔、矿泉、喷淋喷头、水龙头等地方。
(六)军团菌检测流程图
(七)可疑军团菌菌落的进一步鉴定
[*]BCYE或其他培养基上传代培养;
[*]革兰染色镜检;
[*]生化鉴定;
[*]PCR检测军团菌特异性基因片段;
[*]免疫荧光的方法确定军团菌的种类。
小结新的技术助力早诊断、早治疗、患者早受益。
[*]本病例肺部感染明确但早期无病原性阳性数据的支持,导致临床医生只能选用经验性治疗药物治疗。后期借助基因芯片、免疫荧光提供的“阳性”线索,才进一步选用BCYEα培养出军团菌,明确了病原菌,抗感染治疗才有据可依。
[*]对于肺部感染明显但多次培养阴性,应该考虑少见或罕见病原菌感染的可能;微生物室除了常规培养以外,应该建立或利用分子检测手段、免疫学检测等多种检测手段为特殊培养提供线索,从而找到真正病原,为临床医生精准用药提供科学依据。
[*]对于肺部感染患者的下呼吸道痰液,肺泡灌洗液等标本,应该仔细观察其性状,做好涂片质控,为进一步采取特殊培养方法导航。
[*]对于疑难感染病例,应该加强多学科讨论及合作,尤其应该邀请临床微生物检验人员参与到会诊及讨论当中。
[*]军团菌治疗并不难,红霉素、环丙沙星等是特效药物,难的是早期诊断!
[*]微生物室的作用很关键:由“症”到“菌”,由“菌”到“病”,临床思维至关重要!同时新技术必不可少,借助分子手段可以快速检测。
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学习了,谢谢老师分享。好详细啊。 谢谢老师分享,学习啦 学习了,感谢老师分享
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