【感染科普笔记2023-9-28】汤一苇丨临床病毒学今昔
本帖最后由 吴晓梅 于 2024-9-27 15:59 编辑讲者丨汤一苇（丹纳赫集团/赛沛中国首席医学官）
整理丨孔晓明（溧阳市人民医院）
审核丨刘欢（襄阳市中心医院）
来源丨SIFIC 2023“全国感控与耐药感染”联合大会
临床病毒学是诊断医学分支之一，主要检测临床送检标本中是否有某个病毒病原体的存在。如果存在，则需对此病原体进行进一步的鉴定和分析。随着近四十年的相关技术的开发和应用，核酸扩增技术业已成为临床病毒实验室中的主导手段。在中国，临床病毒学科更是迎来一个大的飞跃，直接跨过普通细胞培养及壳瓶培养技术进入了分子时代。汤一苇教授从临床病毒学简介、临床病毒学的过去和现在、临床病毒学的未来走向三个方面，给我们讲述了临床病毒学的发展情况。
一、临床病毒学简介
（一）临床病毒学主要任务
[*]在临床标本中检测临床医生想发现的病毒性病原体。
[*]如果发现了病原体，要对病原体进行鉴定，根据要求可以是定量、毒力、基因分型或病毒学耐药性的检查。
（二）临床病毒学的特点
[*]病毒名称只有一个简单的英文名字，比如艾滋病毒（HIV），没有频繁的变化，没有拉丁文名。
[*]没有必要记住所有的生物化学物质（病毒是否产酸产气），只需要记住病毒是利用宿主细胞来进行复制。
[*]它们是微小的细胞内寄生物，不能用无生命培养基。
[*]它们对所有抗生素都有耐药性，所以在处理标本时可以将培养基里面加入抗生素，从而避免细菌污染。
[*]它们通常对温度敏感，喜欢4℃或-70℃，但讨厌-20℃。
二、70年的里程碑：临床病毒学的过去和现在
（一）临床病毒学的发展史
[*]前细胞培养时代：动物或鸡胚接种。
[*]美国Enders(1897-1985)开创了细胞的培养技术。
[*]中国的临床病毒学研究始于20世纪70年代，华人熊菊贞女士(Gueh-Djen (Edith) Hsiung)在耶鲁大学创立了临床病毒学实验室。美国梅奥医院的Thomas F. Smith (1939-)创造了病毒的壳瓶(shell vial)培养技术。
[*]试剂的演变：单克隆抗体、分子标记。
[*]技术的演变：快速抗原检测(DFA，EIA)，核酸分子检测等。
（二）目前临床病毒感染实验室诊断的基本技术
电镜检测（EM）、细胞学或组织学证据、病毒抗原检测、培养分离鉴定、病毒特异性抗体检测、病原体特异性核酸靶点。其各自的优缺点如下：
[*]EM的优缺点：（1）可以检测挑剔或不可培养的病毒；（2）识别新病毒或新发病毒；（3）快速测试周转时间；（4）检测灵敏度低，病毒浓度需要达到106/ml才可见；（5）免疫电子显微镜可以增强敏感性；（6）昂贵的设备/维护；（7）需要有经验的观察员；（8）特异性差，只能到科的水平，同科病毒难以鉴别。
[*]细胞学或组织学证据：主要是在病毒感染的细胞中寻找包涵体，如CMV病毒感染细胞中会形成巨大的核内包涵体，呈“猫头鹰眼”状，HPV病毒感染细胞中也能形成特殊的细胞病变。但该技术的应用并不普遍。
[*]病毒抗原检测：速度快，但特异性差。
[*]病毒培养分离鉴定：是临床病毒学的金标准，也是确定传染性的最佳方法，能有效培养出病毒，从而进一步开展研究和控制。缺点：仅涵盖可以培养的病毒，耗时且劳动密集。
[*]病毒特异性抗体检测：主要是血清学检测，未知的抗体也能检测出来。比如在感染急性期和恢复期之间抗体滴度的上升、原发感染中IgM的检测，同时在区分外周神经和中枢神经感染中也有独特作用。
[*]病毒特异性核酸靶点：如荧光实时PCR（RT-PCR）、核酸磁珠提取技术、基因测序技术等。还有一些症候群的检测，比如可以用聚合酶链反应呼吸道病毒检测组套（RVP）（xTAG RVP）进行呼吸道病毒的检测。
三、临床病毒学的未来走向
泛基因组学技术用于病毒感染的诊断和监测
小 结
[*]临床病毒学是检验医学的分支学。
[*]细胞培养仍然是临床病毒学实践的金标准。
[*]PCR为临床病毒学带来了革命性的改变，PCR做起来容易，最难的是标本的提取，即核酸的萃取。
[*]分子生物学合理的应用，特别是结果和临床结合的解释非常重要。
[*]后基因组学方法在临床病毒学中的探索与应用，探索如何将分子生物学技术及更先进的技术应用在临床上。
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封面图片来自网络图文：王小虾
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细胞培养仍然是临床病毒学实践的金标准。
PCR为临床病毒学带来了革命性的改变。
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