第二十六期 探秘病原微生物丨擦肩，但不能错过——谈厌氧培养的必要性
《临床微生物学实验室建设基本要求专家共识》中明确提到厌氧菌培养需作为二级、三级医院实验室的必备技术，但实际上进行常规厌氧培养的实验室并未达到百分百，甚至比例较低。原因有多种，主要与厌氧培养的技术难、成本高有直接关系，但也与医务工作人员对厌氧培养的必要性认识不足有关。
不进行厌氧培养，我们会错过什么？首先，当然就是错过众多的厌氧菌。厌氧菌作为实验室众多培养菌中的“小众”，存在感并不强，但不代表其引起的临床感染少见、所致症状轻微。厌氧菌作为正常菌群定植在呼吸道、肠道等部位，但当人体免疫力低下、菌群紊乱、易位时可引起如血液、肺部、泌尿系、生殖道、腹腔等几乎所有部位的感染，一部分厌氧菌还与自闭症、抑郁症有关。厌氧菌引起菌血症的患者死亡率高达63%。临床感染常见的厌氧菌有脆弱拟杆菌群、普雷沃菌属、厌氧消化链球菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌等，病原谱与地区分布有关系，即不同地区分离的菌株分布可能存在差异。
其次，与厌氧菌的耐药监测擦肩而过。虽然甲硝唑、替硝唑等药物在抗厌氧菌感染方面应用广泛，但近些年已出现对这些药物耐药的菌株，尤其革兰阴性厌氧菌对抗厌氧菌药物的耐药性日益增加。美国一项为期8年的研究显示，从2012年至2019年，产气荚膜梭菌对克林霉素的敏感性由91.3%下降到60%，埃格特菌属对哌拉西林-他唑巴坦的敏感性由100%降至24.3%，脆弱拟杆菌群对头孢西丁的敏感性由70.4%降至48.2%，其中产气荚膜梭菌、脆弱拟杆菌均呈现对甲硝唑不同程度的耐药性。国内的一项研究发现，脆弱拟杆菌对甲硝唑的耐药率为7.1%，产气荚膜梭菌对青霉素及亚胺培南的耐药率分别达到57.7%、19.2%。虽然CLSI给出了常见厌氧菌的累积药物敏感性，对于临床经验治疗有一定参考价值，但不可否认的是，厌氧菌的药物敏感性同样存在地域差异，所以实验室开展厌氧菌药敏检测也是必要的。
第三，一些重要的兼性厌氧菌可能会“被”出局。厌氧培养有助于一些兼性厌氧菌的检出，包括提高培养阳性率、缩短阳性培养时间。尤其在血培养这个项目上，诸多研究发现厌氧血培养瓶的使用明显缩短培养瓶阳性报警时间。我们前期研究同样发现在1439套阳性血培养中，有15.3%的菌株仅在厌氧瓶内生长，即若不抽取厌氧瓶会漏检包括54株大肠埃希菌、23株肺炎克雷伯菌、13株金黄色葡萄球菌在内的158株兼性厌氧菌及62株严格厌氧菌。此外，所有厌氧瓶的阳性报警时间中位数时间比需氧瓶短1.1h，主要体现在大肠埃希菌、屎肠球菌，但金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌在厌氧瓶的报阳时间并不优于需氧瓶。除了血培养，临床常见的脓液标本也会体现厌氧培养的优越性，如肠杆菌目细菌在厌氧环境下较普通空气培养生长更好，链球菌更是如此（图1）。
此外，还涉及免疫受损患者的感染、复杂感染、多微生物感染等情况。这些感染中都有厌氧菌的身影。错过了它，不仅仅是医务工作者学习提高认知实践的遗憾，更可能是患者诊治的遗憾。
简单叙述了曾经的和即将的错过，遥望其他实验室能够检出的产气荚膜梭菌、艰难梭菌、脆弱拟杆菌等厌氧菌，大家有没有羡慕？如果想了解自己实验室的厌氧菌分布、耐药特征，自己医院的厌氧菌感染与治疗，就把厌氧培养技术操练起来吧！！
这里给大家留一个小问题？什么是耐氧试验？怎么做呢？
https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/NhbOcgUfdXsmwSLT3oaI7P40iaWJeUM6v1at4AWiaGjetptQIibDNweqRRya68ZxDEWpXvibnRoehI3xv6Hr7XfXGA/640?wx_fmt=png图1 阑尾脓液培养
说明：
[*]左侧为厌氧布氏培养基（厌氧培养24h），生长大量口腔链球菌。
[*]右侧为普通血/中培养基（5%CO2培养24h），生长大量鲍曼不动杆菌。
延伸阅读：2011年日本专家在JIC增刊1上发表了系列厌氧菌文章，大家可以学习。
[*]Japanese Society of Chemotherapy Committee on guidelines for treatment of anaerobic infections; Japanese Association for Anaerobic Infections Research. Chapter 1-1. Anaerobic infections (General): epidemiology of anaerobic infections. J Infect Chemother. 2011 Jul;17 Suppl 1:4-12. doi: 10.1007/s10156-010-0169-y. PMID: 21728084.
[*]Japanese Society of Chemotherapy Committee on guidelines for treatment of anaerobic infections; Japanese Association for Anaerobic Infection Research. Chapter 2-1. Anaerobic infections (individual fields): respiratory infections. J Infect Chemother. 2011 Jul;17 Suppl 1:42-6. doi: 10.1007/s10156-010-0137-6. PMID: 21728090.
[*]Japanese Society of Chemotherapy Committee on guidelines for treatment of anaerobic infections; Japanese Association for Anaerobic Infection Research. Chapter 3-1. Appendix: Latest classification and nomenclature for anaerobes. J Infect Chemother. 2011 Jul;17 Suppl 1:140-58. doi: 10.1007/s10156-010-0161-6. PMID: 21728114.
总共20多篇。有上面三篇，不难找到。编撰机构是，日本化学疗法学会厌氧感染治疗指南委员会，日本厌氧感染研究协会。
近期病例报道：
[*]Morton AB, Boyle E, Pettengill MA, Gancher E. The Brief Case: Strictly Anaerobic and Staining Acid Fast. J Clin Microbiol. 2023 May 23;61(5):e0015022. doi: 10.1128/jcm.00150-22. Epub 2023 May 23. PMID: 37219093; PMCID: PMC10204630. 该文报道了劳森菌属菌种——克利夫兰劳森菌（Lawsonella clevelandensis）。全球病例较少。
[*]Cyr AM, Perlman M, Denefrio CL, Kumar J, Sanders A. A Cryptic Case of an Anaerobic Hepatic Abscess Following a Cesarean Section. Cureus. 2023 Apr 8;15(4):e37293. doi: 10.7759/cureus.37293. PMID: 37168151; PMCID: PMC10166248.
[*]Jiang Y, Qin W, Li J, Gao Y, Zeng Y. A case report of sepsis and death caused by Parvimonas micra, a rare anaerobe. Front Public Health. 2022 Sep 20;10:994279. doi: 10.3389/fpubh.2022.994279. PMID: 36203671; PMCID: PMC9530780. Parvimonas micra即微小小单胞菌。
[*]Itoh N, Akazawa N, Ishibana Y, Hamada S, Hagiwara S, Murakami H. Femoral osteomyelitis caused by oral anaerobic bacteria with mixed bacteremia of Campylobacter rectus and Parvimonas micra in a chronic periodontitis patient: a case report. BMC Infect Dis. 2022 Jul 14;22(1):613. doi: 10.1186/s12879-022-07573-2. PMID: 35836203; PMCID: PMC9281128.
[*]Tang Q, Ye B, Wang P, Ke L, Tong Z, Li W. Identification of Anaerobic Organism Infection in a Patient With Emphysematous Pancreatitis Based on Metagenomic Next-Generation Sequencing: A Case Report. Pancreas. 2022 May 1;51(5):e85-e87. doi: 10.1097/MPA.0000000000002060. PMID: 35973024.
[*]Nakagawa Y, Otake S, Oue T, Ryu H, Kasai M. Case of infant invasive Streptococcus intermedius infection suggesting the need for anaerobic cultures. J Infect Chemother. 2022 Mar;28(3):437-439. doi: 10.1016/j.jiac.2021.11.002. Epub 2021 Nov 16. PMID: 34794869. 此例是通过厌氧培养检出，所以呼吁重视厌氧培养。
[*]Li X, Du H, Song Z, Wang H, Long X. Polymicrobial Anaerobic Meningitis Detected by Next-Generation Sequencing: Case Report and Review of the Literature. Front Med (Lausanne). 2022 Feb 22;9:840910. doi: 10.3389/fmed.2022.840910. PMID: 35273982; PMCID: PMC8902384.
往期回顾：第一期 探秘病原微生物专栏丨微生物、病原微生物、微生物学、临床微生物学https://bbs.sific.com.cn/thread-259293-1-1.html
第二期 探秘病原微生物专栏丨感染和感染性疾病、传染和传染病https://bbs.sific.com.cn/thread-259439-1-1.html
第三期 探秘病原微生物专栏丨关于微生物学分类和范畴的说明https://bbs.sific.com.cn/thread-259676-1-1.html
第四期 探秘病原微生物专栏丨金黄色葡萄球菌https://bbs.sific.com.cn/thread-259909-1-1.html
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