【感染科普笔记2023-1-18】黄小平丨高通量测序对于脓毒症病原体早期诊断的实践和思考
本帖最后由 wuxing718 于 2024-9-28 17:17 编辑黄小平丨高通量测序对于脓毒症病原体早期诊断的实践和思考https://mp.weixin.qq.com/s/OtbiixRbH3X60BroZ_kKEQ
讲者丨黄小平
整理丨王盼/刘阳子（榆林市第一医院）审核丨蓝雪0816来源丨2021年SIFIC全国感控与耐药感染大会
脓毒症是指由感染因素引起的全身炎症反应综合征，严重者可导致器官功能障碍和（或）循环障碍。该病发生率高，每年以1.5%～8.0%的速度上升，且病情凶险、病死率高，对人类健康造成巨大的威胁。然而，脓毒症的早期诊断对其病情的发展及愈后尤为重要。第十七届上海国际医院感染控制论坛（SIFIC）暨第五届东方耐药与感染大会（OCAMRI）联合会议上，苏州大学附属第一医院感染病科副主任黄小平教授利用高通量测序早期诊断脓毒症病原体，并分享实践工作经验，为临床早期诊断脓毒症提供新颖思路。脓毒症的现状随着全球人口老龄化日渐严重，免疫缺陷患者逐年增多，脓毒症的发病率逐年上升，通过对195个国家和地区的脓毒症发病率、死亡率等数据进行统计；全球约有4890万人脓毒症发病，1100万人发生脓毒症相关死亡，约占全球死亡人数的19.7%，尽管大量基础、临床学者投入在脓毒症的研究当中，然而该病的诊断治疗效果不容乐观。
脓毒症的病原体早期诊断的重要性脓毒症早期病原体诊断对患者的愈后至关重要，每延迟1小时使用有效抗菌药物及支持治疗可导致患者的死亡率增加5%～10%，其中30%～50%脓毒症患者难以明确病原微生物，造成治疗延迟甚至失败，从而增加病死率。虽然血培养是脓毒症的金标准，然而其阳性率较低，同时受采血前抗菌药物使用、采血时无菌技术操作、运输等因素的影响；且传统的诊断技术具有检测周期长、准确率低、检测面窄等缺点。
mNGS技术在脓毒症中的应用及面临的困境与传统技术比较，mNGS（宏基因组二代测序）技术具有灵敏度、特异性高等特点，对脓毒症的早期诊断至关重要，早期检测血内病原体游离DNA，诊断引起脓毒症的病原体，在血流感染的前3天，通过宏基因组测序检测血浆中病原体的游离DNA可预测患者血流感染的可能性，为早期干预、控制病情发展提供依据。
mNGS技术在感染性病原检测中应用相当广泛，其利用血液的检测基础是，一种情况为病原颗粒进入外周血后，凋亡后核酸释放到外周血环境中形成mcf DNA；另一种情况为病原颗粒未进入外周血而仅存在于局部感染病灶，凋亡后核酸进入外周血中形成mcf DNA。在脓毒症病原体早期诊断过程中，高通量测序技术以血液或局部感染灶的mcf DNA为基础，然而即使检测到游离DNA，并不完全代表一定有存活的病原体，目前正在研发新的技术，其主要对外周血中的游离DNA和游离病原体进行分离检测，保持对脓毒症病原检测的高阳性率，即可准确区分菌血症与非菌血症。辅助精准诊断活的病原体，这对诊断菌血症、脓毒症价值更大，以此来弥补宏基因二代测序的不足。
感染快速识别快速评估床旁涂片、染色、镜检可在5分钟内识别细菌、真菌的感染状态，床旁PCR技术检测，可在0.5～3小时精准识别病原菌及其耐药基因，mNGS技术可在早期、快速精准识别病原体，对提前干预、早期预防疾病发展为脓毒症及指导早期隔离、评估标本污染、定植、感染具有一定的价值。尽管病原菌检测技术革新迭代，而我们仍离不开显微镜辅助检查，通过形态学可指导分子诊断。
展望在脓毒症诊断中希望能够研发出具有更高检测效能的技术，从而提高灵敏度、特异性，加快检测速度，为临床提供更丰富的检测结果；同时多种检测技术相结合，能够取长补短，弥补当前技术的不足。
感悟黄小平主任通过分享高通量测序对于脓毒症病原体早期诊断的实践经验，从“脓毒症现状及传统诊断的弊端，脓毒症早期诊断的重要性、mNGS技术在脓毒症中的应用及面临的困境及临床实践”等方面做了全面的阐述，为感染疾病科老师在脓毒症早期诊断方面提供了宝贵的思路。
图文：王小虾
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