为什么通常不采用分子技术直接检测血液中的菌原菌
众所周知，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是1985年Kary Mullis发明的新技术，1993年获诺贝尔化学奖。该技术一种用于放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它的最大特点就是能将微量DNA大幅增加。近年来，随着实时PCR、多重PCR的发展和与其他分子生物技术的融合，以及相关仪器设备在分析速度和自动化程度方面取得显著进步，PCR技术越来广泛地应用于临床微生物学诊断。然而，不知道大家注意到没有，PCR技术及相关的分子检测技术主要用于病毒检测，包括各种组织和体液中的病毒，如HBV、HCV、HIV、EB病毒、I/II型单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒等。PCR技术也有用于细菌检测，但主要用于有菌部位，如生殖道特沙眼衣原体和淋球菌筛查，呼吸道标本中的特殊病原体（百日咳鲍特菌、军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体）检测等（表1和表2），而很少提到血液标本，尤其是血流感染时病原菌的直接检测。
表1、美国FDA批准的一些分子诊断方法
实验方法公司
沙眼衣原体检测PCRRoche
连接酶链反应Abbot
转录介导的扩增Gen-Probe
杂交捕获法Digene
淋球菌检测连接酶链反应Abbot
杂交捕获法Digene
沙眼衣原体和淋球菌筛查 杂交法Gen-Probe
链替代扩增反应Becton-Dickimson
结核分枝杆菌检测PCRRoche
转录介导的扩增Gen-Probe
人乳头瘤病毒筛查杂交捕获法Digene
巨细胞病毒检测杂交捕获法Digene
核酸序列依赖扩增 Organon/Teknika
A群链球菌检测杂交法Gen-Probe
HIV定量检测PCRRoche
阴道加特纳菌、阴道毛滴虫和念珠菌检测杂交法Gen-Probe
表2、一些重要细菌、病毒的核酸检测
微生物标本类型临床诊断
EB病毒脑脊液EB病毒淋巴组织增生紊乱
I、II型单纯疱疹病毒脑脊液、人玻璃体脑炎
水痘-带状疱疹病毒多种组织水痘
多瘤病毒脑脊液进行性多病灶脑白质病
肠道病毒脑脊液病毒性脑膜炎
小病毒B19羊水胎儿水肿
血清贫血
腺病毒膀胱、组织、血液免疫抑制病人，器官移植病人
埃里希体血液人埃里希体病
百日咳鲍特菌鼻咽百日咳
军团菌呼吸系统肺炎
肺炎衣原体呼吸系统肺炎
肺炎支原体呼吸系统肺炎
幽门螺杆菌胃液、粪便胃溃疡
那么，为什么不直接采用PCR及相关的分子生物学技术用于血液标本，尤其是血流感染和脓毒血症病原菌的直接检测呢，其主要原因包括：1）血流感染时血液中的细菌含量低，在20~100个/ml 之间（甚至更低），从而导致常规方法提取的细菌DNA浓度低而无法达到PCR所需要的浓度；2）人体细胞DNA浓度高，非有效去除时，可能会对常规的细菌DNA提取方法存在干扰。3）分子方法成本高，且存在假阴性风除；而血培养成本低，阳性率远高于非培养的分子方法，且可以提供药敏实验结果。
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