20170418【感控笔-孙宏莉】应用新型微生物学诊断技术加强感控能力的建设
本帖最后由 dufengxia 于 2017-9-12 11:15 编辑整理：杜凤霞(内蒙古包钢医院) 审稿：宁永忠(SIFIC感控笔记团队)
感染性疾病日益肆虐猖獗，病原种类也不断增多——从型到种不断更新，新的机会致病菌、新发传染病层出不穷，给人类带来了极大的挑战。面对这样的局面，我们该应用何种技术进行检测呢？在MRSA、VRE、CRE等病原微生物快速准确检测，及时预防和控制医院感染发生的过程中，微生物学实验室（检验科）起到了举足轻重的作用。
在第25次全国医院感染学术年会上，来自北京协和医院检验科的孙宏莉教授带来了《应用新型微生物学诊断技术加强感控能力的建设》的演讲，具体讲解如何将经典方法和新型技术有效地结合起来，提高感控能力建设，有助于大家的专业工作。
一、实验室工作的重要性1、早期给临床提供具体的病原学方向，辅助临床医生早期诊断、及时治疗；2、准确检测为临床带来确定诊断、精准治疗3、为院感控制提供有利的证据
二、病例分析病例分析1：一名眼外伤患者抽取玻璃体腔液检测结果：涂片革兰染色：革兰阴性梭状杆菌、菌体中央浓染病原学提示：疑似厌氧梭杆菌感染 采用的经典方法：革兰染色形态学检查
病例分析2：男，42岁。间断发热2年，体重下降，肝脾大，腹胀，乏力并伴右侧肋下间断隐痛。双侧锁骨上、双侧腹股沟区均可触及数枚肿大淋巴结，大小不等，边界清楚，质韧，但是无压痛，表面无破溃或窦道形成，并且周围组织并不粘连。脾脏增大入盆腔，质地偏硬，轻压痛。2009年患者在甘肃陇南山区从事隧道开凿工作。病理与微生物学联合诊断：巨噬细胞胞浆内可见利什曼原虫，胞外可见少量采用的经典方法：骨髓涂片+微生物学诊断
病例分析3：患者男，59岁，常出入南美洲林区。反复肛瘘6年、舌痛性溃疡3月，间断高热，多次手术治疗肛瘘但不愈，皮肤色素沉着。实验室检查： 血常规及血沉正常、血HIV、梅毒抗体阴性，多次血培养细菌及真菌均阴性，TB相关检查均阴性，消化道、肺、双肾上腺受累，结肠息肉、舌溃疡等；病理HE染色提示慢性肉芽肿性炎。病理诊断：组织胞浆菌病；微生物学培养：1个月后阳性证实。口服伏立康唑200mg Bid，1个月后舌部溃疡愈合，肛瘘好转，随诊1年无复发。采用的经典方法：病理HE染色+微生物学诊断
病例分析4：患儿男，7岁不明原因发热39-40℃，经验抗感染治疗。用药包括：青霉素、强的松、病毒唑、阿昔洛韦、干扰素、地塞米松、阿米卡星。第一次血培养：表皮葡萄球菌；第二次血培养延迟报警，结合显微镜结果疑似布鲁菌感染。骨穿（-）。北京协和医院细菌室镜检布鲁菌但临床病史信息证据不足，患儿春节过后未接触羊肉，日常喝牛奶。电话建议：抽血“布鲁菌抗体检测”
协和医院购置法国梅里埃布鲁菌抗体检测试剂盒，结果确定为布鲁菌感染病原学诊断报告：布鲁菌感染治疗建议：1、WHO推荐：多西环素+利福平治疗6w建议首选方案1。注意肝毒性。若肝功能异常，去掉利福平待肝功能正常再加利福平2、多西环素+庆大霉素或链霉素联合治疗注意耳毒性和肾毒性此例采用的经典方法：细菌形态学+血清免疫学
三、目前新型微生物学诊断技术国际上微生物学一直是研究热点。新型微生物学检测技术层出不穷。后文介绍3种已经走入临床实验室的技术。包括质谱、微流控芯片、高通量测序。
（一）质谱定义：基质辅助激光解吸电离飞行时间，质谱“微生物学实验室的革命”主要原理：微生物核糖体蛋白谱图比对主要应用：病原细菌/真菌鉴定优势：操作简单、快速鉴定、耗材成本较低局限：设备成本高、数据库有限 部分如分枝杆菌、丝状真菌样本的处理需完善实验室生物安全方面准备。
（二）微流控芯片定义：芯片上构建微流路，于芯片上进行反应；技术优势：消耗能量、样品、试剂极少；分析速度快、通量高；可高度集成、体积小；未来发展方向：芯片实验室主要应用：1、血流病原菌富集+PCR鉴定1（1）利用细菌/真菌与血细胞电导率差异，富集菌体。（2）病原特异性PCR2、病原快速药敏测定1（1）4小时内完成检测。（2）与CLSI M系列标准符合率>90%。（3）可实现单细胞敏感性测定。（4）可实现自动化。3、病原核酸检测平台（1）以“疾病”为基础。（2）敏感、快速、“傻瓜”。4、液相芯片技术适合筛查，不明病原体急诊筛查、检测流程简单快速
（三）高通量测序临床应用：1、未知病原检测；（1）不明原因发热：新发病原、罕见病原。（2）不能培养/生长缓慢：病毒、非典型病原体、抗菌药物使用后表型改变的病原体。（3）病原载量低。（4）检测手段不足
2、院感暴发监测、溯源
体会新型方法与经典方法密切相关，新型方法的基础和起点仍然是经典方法，而经典方法的升华和超越是新型方法。实验室工作尤其微生物学检验是判断医院感染的基础，是医院感染控制的一个重要环节，直接关系到医院感染监测及控制的水平。在今后的工作中巧妙地应用经典方法和新型方法，为临床提供及时、快速、准确的检验信息，可以进一步提高感控专业能力。图文编辑：宋小船
审稿：卢先雷 陈文森
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