明玥 发表于 2013-12-23 10:14

【第二周获奖组图存疑】物体表面的正确采样方法

本帖最后由 拙凌 于 2013-12-23 20:57 编辑

看到每周组图中多重耐药菌物体表面采样方法中第五幅图为转动棉签，密涂平板。不禁产生疑问：棉签在含有琼脂的平板上转动，是棉签上的物质存留在琼脂上，还是琼脂被棉签蘸走了？http://bbs.sific.com.cn/thread-120300-1-1.html和消毒技术规范上正确的检验方法有所出入。以下是消毒技术规范上物体表面正确采样和检测方法。A.5物体表面的消毒效果监测A.5.1采样时间在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进行采样。A.5.2采样方法用5 cm×5 cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，被采表面＜100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml无菌检验用洗脱液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体表面采样。采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。A.5.3检测方法充分震荡采样管后，取不同稀释数倍的洗脱液1.0 ml接种平皿，将冷至40 ℃～45 ℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15 ml～20 ml，36 ℃±1 ℃恒温箱培养48h，计数菌落数。怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

╰☆素衣☆╮ 发表于 2013-12-23 10:36

老师工作很细致，我要到细菌室看他们怎么做的

黔西南妇幼 发表于 2013-12-23 10:46

学习了，谢谢老师！！！

.快乐 发表于 2013-12-23 11:15

谢谢老师分享，学习了。

罗子木 发表于 2013-12-23 11:26

下载收藏了。谢谢老师分享

bdfygrb 发表于 2013-12-23 11:36

向老师学习了，谢谢老师分享！！

常回家看看208 发表于 2013-12-23 17:14

是的,没有投多重耐药菌也是因为采样方法有疑问.我们是用棉签1支浸无菌0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS），在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml无菌检验用洗脱液的试管中送检。细菌室如何操作没有关注过,但采们我们院感办每月都做.

二道桥的羊肉串 发表于 2013-12-23 19:54

个人认为是直接将粘有琼脂的棉签直接的进行涂抹，琼脂应在被检测的表面上。这个好像跟监测结果影响不大吧？

明玥 发表于 2013-12-24 09:14

扬帆启航 发表于 2013-12-23 19:54 static/image/common/back.gif
个人认为是直接将粘有琼脂的棉签直接的进行涂抹，琼脂应在被检测的表面上。这个好像跟监测结果影响不大吧？

在采样时，棉签是无法蘸着平皿中的琼脂进行物体表面采样的，更何况要涂抹物体表面面积100cm2。或者小型物体的表面。

拙凌 发表于 2013-12-24 10:07

我爱青青河边草 发表于 2013-12-24 09:14 static/image/common/back.gif
在采样时，棉签是无法蘸着平皿中的琼脂进行物体表面采样的，更何况要涂抹物体表面面积100cm2。或者小型物 ...

我的理解与您稍有不同。
这幅组图的命题是：多重耐药菌物体表面采样，也就是说，此时采样目的是找到目标菌，而不是监测消毒后的效果。
至于您质疑的“棉签在含有琼脂的平板上转动，是棉签上的物质存留在琼脂上，还是琼脂被棉签蘸走了？”这是及时接种标本的操作，琼脂也不会被棉签蘸走。

gaoxd5 发表于 2013-12-24 15:57

您看的很仔细
但是这是基于采样目的的不同而做的不同类型的采样方式
消毒技术规范规定的采样方式是对于消毒后物体表面清洁度评价而采用的方法，最后的琼脂倾注法只能使用十分之一的液体进行培养，灵敏度偏低
目前采用的采样方式，不存在定量的概念，只是通过各种方式，尽可能查找医院环境及物体表面是否存在多重耐药菌，一旦检出，就说明环境中存在交叉传播的风险，与量无关。所以未采用规范的方法

明玥 发表于 2013-12-25 14:23

gaoxd5 发表于 2013-12-24 15:57 static/image/common/back.gif
您看的很仔细
但是这是基于采样目的的不同而做的不同类型的采样方式
消毒技术规范规定的采样方式是对于消 ...

上午专门和检验科人员进行探讨了这个问题，这种直接将棉签在琼脂上涂抹，因棉签与平皿中的琼脂接触面受限，会导致监测结果尤其是细菌定量上出现偏差。呵呵，通过讨论，使我更明了了！！

青暮 发表于 2013-12-27 10:48

本帖最后由 青暮 于 2013-12-27 11:02 编辑

非常感谢各位老师提出的宝贵意见与建议！首先回答您的疑问，应该是采样棉签上的细菌等物质经涂布留在了琼脂上。我们这里只是针对多重耐药菌的一个检测，只看检出率，而未精确到一个确定的浓度。实际操作过程中，严格按照技术规范上要求有一定难度，且不是对消毒效果的监测。物体表面各种各样，面积也仅能估算。倾注法需实验室预先配制培养基，一般仅是基础培养基，还需后续对细菌进行筛选鉴定，且接种量较少（仅1.0ml），考虑若本身物表细菌量较少存在漏检或检出率过低等问题，故采样直接涂布接种法，以多重耐药筛选平板与棉拭子（经无菌水或生理盐水）直接采样，简单快速地对物表进行筛查，发现是否存在多重耐药菌。

茉莉花开 发表于 2014-1-6 19:28

青暮 发表于 2013-12-27 10:48
非常感谢各位老师提出的宝贵意见与建议！首先回答您的疑问，应该是采样棉签上的细菌等物质经涂布留在了琼脂 ...

我明白了，可惜的是在找寻多重耐药菌的监测中，微生物室没有采纳我的意见。

高山雪莲W 发表于 2014-1-14 17:48

青暮 发表于 2013-12-27 10:48
非常感谢各位老师提出的宝贵意见与建议！首先回答您的疑问，应该是采样棉签上的细菌等物质经涂布留在了琼脂 ...

赞同您的做法，平时抽检，我就是采取直接涂抹法，阳性率大大提高，且能发现一些问题，更有利于用证据说话，提高改进力度。

ming928 发表于 2014-1-17 15:20

谢谢老师分享，学习了。

xtz20110912 发表于 2014-3-11 15:16

好难呀，这些应该是检验科该熟知的吧。

连夜雨潇潇 发表于 2014-3-26 21:23

内容谢谢老师的分享，学习了。
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